类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达

来源 :吉林大学学报：医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：irugi

【摘要】

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目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编

【作者】

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杨南扬缪璇伍贤军刘金美辻一郎李晓萌

【机构】

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东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所,日本东北大学医学部公共卫生学院

【出处】

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吉林大学学报：医学版

【发表日期】

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2011年6期

【关键词】

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类泛素化蛋白3 GST融合蛋白蛋白纯化 SUMO3 GST fusion protein protein purification

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助课题(30871301,30700827), 科技部国际合作项目资助课题(2010DFA31430), 教育部新世纪优秀人才支持计划资助课题(NCET-10-0316), 高校基本科研业务费专项资金资助课题(09SSXT035,10SSXT147,10JCXK004), 吉林省科技厅科研基金资助课题(20080731,200905116)

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目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过B

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