【摘 要】
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目的:探究miR-30c调控骨肉瘤细胞增殖及转移的机制.方法:通过TargetScan、MiRGen等数据库分析预测miR-30c可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证候选靶基因与miR-30c的靶
【机 构】
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新疆医科大学第六附属医院关节外科,新疆乌鲁木齐830002
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目的:探究miR-30c调控骨肉瘤细胞增殖及转移的机制.方法:通过TargetScan、MiRGen等数据库分析预测miR-30c可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证候选靶基因与miR-30c的靶向相关性,构建U2OS细胞miR-30c mimic/inhibitor细胞系,定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(WB)验证miR-30c对候选靶基因表达的影响.收集2016年5月至2018年5月于新疆医科大学第六附属医院接受骨肉瘤切除术的37例患者的癌组织与癌旁组织,qRT-PCR及WB检测miR-30c与候选靶基因在体内组织中表达相关性,免疫组化检测组织水平候选靶基因的表达分布.CCK8、Transwell小室实验分别用于检测miR-30c与候选靶基因对U2OS细胞增殖及转移能力的影响.结果:数据库筛选预测miR-30c与SIRT1存在靶向结合的位点,双荧光素酶报告实验显示野生型SIRT1报告基因质粒共转染miR-30c mimic后荧光素酶活性较对照组受到抑制(P ＜0.001),U2OS细胞内miR-30c高表达抑制SIRT1蛋白表达而对SIRT1 mRNA表达无影响.体内组织学水平检测显示miR-30c与SIRT1蛋白表达呈负相关(P =0.006),免疫组化结果表明SIRT1高表达于miR-30c低表达的肿瘤组织中.过表达miR-30c抑制U2OS细胞增殖及转移能力,miR-30c mimic共转染SIRT1真核表达载体后,细胞增殖及转移能力较对照组差异无统计学意义.结论:miR-30c可能通过负调控SIRT1的表达参与骨肉瘤细胞U2OS的增殖及转移.
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