【摘 要】
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目的:探索小窝蛋白(Cav)-1对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障完整性的破坏作用.方法:体外培养人脑微血管内皮细胞HBEC-5i并构建血脑屏障模型.以不同浓度的NMDA孵育HBEC-5i,并观察其对细胞活力的影响.细胞分别用NMDA受体(NMDAR)拮抗剂MK-801或Cav-1抑制剂Daid-zein预处理后再用NMDA孵育.蛋白免疫印记(westem blotting)法检测ZO-1、Cav-1及p-Cav-1蛋白的表达;实时荧光
【机 构】
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广西医科大学第一附属医院神经内科,南宁530021
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目的:探索小窝蛋白(Cav)-1对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障完整性的破坏作用.方法:体外培养人脑微血管内皮细胞HBEC-5i并构建血脑屏障模型.以不同浓度的NMDA孵育HBEC-5i,并观察其对细胞活力的影响.细胞分别用NMDA受体(NMDAR)拮抗剂MK-801或Cav-1抑制剂Daid-zein预处理后再用NMDA孵育.蛋白免疫印记(westem blotting)法检测ZO-1、Cav-1及p-Cav-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ZO-1 mRNA的表达;跨膜细胞电阻仪Millicell ERS Volt-Ohm meter测量血脑屏障模型跨内皮细胞膜电阻(TEER)值.结果:与对照组比较,NMDA组p-Cav-1蛋白表达升高(P＜0.05),ZO-1蛋白和mRNA表达下降(P＜0.01),同时TEER值下降(P＜0.001).与NMDA组比较,使用MK801拮抗NMDAR活化后ZO-1蛋白和mRNA水平上调(P＜0.05),TEER值增加(P＜0.001);用Daidzein抑制Cav-1活化可下调p-Cav-1蛋白表达(P＜0.05),上调ZO-1蛋白和mRNA表达(P＜0.05)以及增加TEER(P＜0.001).结论:NMDA可诱导HBEC-5i中紧密连接蛋白ZO-1的破坏,从而增加紧密连接屏障的通透性.抑制Cav-1的活化可阻断NMDA诱导的ZO-1表达下降和减少TEER.
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