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目的 以河北省常见鼠疫媒介蚤为研究对象,使用线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (CO Ⅰ)基因和细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ (CO Ⅱ)基因对其进行分子生物学鉴定,建立河北省常见蚤种的DNA条形码数据库.方法 2018年6-8月在张家口市康保牧场采集鼠体寄生蚤及洞干蚤,2018年9-10月在张家口崇礼区采集鼠体寄生蚤,经形态学鉴定后,选取标本形态完整的不同蚤种提取总DNA,扩增线粒体CO Ⅰ和COⅡ基因片段,并进行测序,将测序结果与GenBank中蚤类序列进行BLAST同源性比对,利用邻接法构建CO Ⅰ和CO Ⅱ基因序列的系统进化树.结果 选取的16份蚤类样本均能通过PCR扩增出特异性CO Ⅰ和C0Ⅱ基因条带,其中13份样本CO Ⅰ测序成功,12份样本COⅡ测序成功.CO Ⅰ基因的分子进化树结果中,12份样本与形态学鉴定结果一致,1份样本与形态学有差异.COⅡ基因的分子进化树结果与形态学鉴定全部一致.结论 COⅠ和COⅡ基因均可作为DNA条形编码基因对河北省鼠疫疫源地的常见蚤类进行物种鉴定,利用2个基因同时进行蚤种鉴定提高了鉴定的成功率,所积累数据为以后的蚤类分子鉴定技术提供了可利用的数据库.