【摘 要】
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目的 建立潮汐式生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的工艺.方法 利用500 mL的潮汐式生物反应器CelCradleTM培养Vero细胞,通过葡萄糖含量监测及活细胞计数进行换液,待活细胞
【机 构】
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中国医学科学院医学生物学研究所,云南昆明,650118
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目的 建立潮汐式生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的工艺.方法 利用500 mL的潮汐式生物反应器CelCradleTM培养Vero细胞,通过葡萄糖含量监测及活细胞计数进行换液,待活细胞数目达2.75×109个时,分别按0.01、0.05、0.1和0.2 MOI接种轮状病毒ZTR-68株,于37℃,5％ C02培养箱中培养7d,每天取样,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测病毒基因组核酸带型,免疫荧光法检测病毒增殖情况,透射电镜观察病毒的形态结构,蚀斑法检测病毒滴度,确定生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的最适MOI.结果 在CelCradleTM反应器中接种3×108个Vero细胞,经7d培养,活细胞数目可达2.75×109个;以0.05 MOI轮状病毒ZTR-68接种Vero细胞的病毒基因组带型与转瓶培养的保持一致,感染后3～5d,轮状病毒荧光阳性细胞数目最多,电镜下可见形态结构完整的轮状病毒颗粒;以0.05 MOI接种轮状病毒ZTR-68株96 h病毒滴度最高,为7.7 LogPFU/mL.结论 初步建立了潮汐式生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的工艺,为进一步大规模生产轮状病毒灭活疫苗奠定了实验基础.
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