【摘 要】
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目的 探讨circKMT2E在老年性白内障(ARC)患者中的表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响.方法 取10例在我院接受白内障手术的ARC患者晶状体前囊膜,另选取4例健康捐献者透明晶状体前囊膜作为对照.使用Trizol试剂从人晶状体前囊膜组织中提取总RNA.依次使用cutadapt软件、DCC软件(v0.4.4)、STAR软件(v2.51 b)、CircBase数据库和circ2Trait数据库对所测得的环状RNA(circRNA)进行注释,筛选circRNA差异表达.将体外培养的SRA01-04细胞
【机 构】
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750002 宁夏回族自治区银川市,宁夏回族自治区人民医院眼科,宁夏眼科医院,西北民族大学第一附属医院,宁夏致盲性眼病临床医学研究中心;637000 四川省南充市,川北医学院附属医院眼科
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目的 探讨circKMT2E在老年性白内障(ARC)患者中的表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响.方法 取10例在我院接受白内障手术的ARC患者晶状体前囊膜,另选取4例健康捐献者透明晶状体前囊膜作为对照.使用Trizol试剂从人晶状体前囊膜组织中提取总RNA.依次使用cutadapt软件、DCC软件(v0.4.4)、STAR软件(v2.51 b)、CircBase数据库和circ2Trait数据库对所测得的环状RNA(circRNA)进行注释,筛选circRNA差异表达.将体外培养的SRA01-04细胞随机分组,其中,空白对照组:用正常培养液培养,不作特殊处理;miR-control组:转染miR-control无序序列;miR-34a组:转染miR-34a-5p mimics序列;miR-34a+control组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-control空载体;miR-34a+HMGB1组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-HMGB1质粒.采用实时荧光定量PCR与双荧光素酶报告基因检测基因表达情况.通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达.结果 经生物信息学分析显示,circKMT2E在ARC患者晶状体前囊膜组织中表达上调最为显著.双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-34a-5p后circKMT2E-WT报告基因的荧光素酶活性由1.000±0.023降低至0.502±0.057(P0.05).miR-34a组SRA01-04细胞凋亡率(23.59％±3.47％)较miR-control组(3.82％±0.41％)增高(P<0.05),而miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞凋亡率(8.97％±1.20％)较miR-34a-control组(24.59％±4.33％)降低(P<0.05).miR-34a组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白、Bax蛋白相对表达量较miR-control组均升高,同时Bcl-2蛋白相对表达量则降低(均为P<0.05);miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白和Bax蛋白相对表达量较miR-34a-control组均降低,同时Bcl-2蛋白相对表达量较miR-34a-control组增加(均为P<0.05).结论 circKMT2E可通过海绵吸附miR-34a-5p减弱其对下游靶点HMGB1的抑制作用,进而有效地阻止SRA01-04细胞凋亡,在一定程度起到延缓ARC发展的作用.
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