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【目的】脂肪酶可以通过高效催化动植物油脂发生转酯反应得到生物柴油，而固定化技术可以极大地提高脂肪酶的使用效率并降低生产成本。【方法】以海藻酸钠为载体，采用海藻酸钠包埋和新型环氧交联剂乙二醇缩水甘油醚交联联合法固定脂肪酶，通过单因素试验和正交试验法共同确定脂肪酶的固定化方案。【结果】最佳固定条件为海藻酸钠浓度2．5％，给酶量400U／mL海藻酸钠溶液，氯化钙5％，固定20min，以0．35％的乙二醇缩水甘油醚为交联剂，25℃条件下交联1h，由此制备得到酶活约为84．90U／g的固定化酶。【结论】固定化酶的最