【摘 要】
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目的 分析miRNA-144在原发性肝癌中的表达水平及对小鼠肝癌模型肠道菌群的影响,并探讨相关机制.方法 采用实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测50例原发性肝癌癌组织/癌旁正
【机 构】
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广州中医药大学实验动物中心SPF动物室,广东广州,510006
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目的 分析miRNA-144在原发性肝癌中的表达水平及对小鼠肝癌模型肠道菌群的影响,并探讨相关机制.方法 采用实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测50例原发性肝癌癌组织/癌旁正常组织和不同肝癌细胞系中miRNA-144水平;构建miRNA-144过表达慢病毒载体,并将其转染至肝癌细胞中,筛选干扰效率最佳的稳定肝癌细胞注射至裸鼠右腋皮下,称miRNA-144过表达组,同时还须设立阴性对照组(稳定转染的NC肝癌细胞注射至裸鼠右腋皮下)和空白对照组(正常肝癌细胞注射至裸鼠右腋皮下),均在标准饮食条件下饲养,每周测量各组裸鼠体质量和肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,28 d后处死裸鼠;收集各组裸鼠肠道内容物进行培养,并计算每克肠道内容物中常见细菌种类的数量;处死后制作肿瘤组织标本,并行常规病理检测,后用qRT-PCR检测各组肿瘤组织中miRNA-144水平,用Western-Blot检测各组肿瘤组织中Toll-样受体4(TLR4)和核转录因子(NF-κB)p65蛋白水平.结果 肝癌癌组织中miRNA-144表达水平明显高于癌旁正常组织,肝癌细胞MHCC-97H中miRNA-144表达水平明显低于肝癌细胞Hep3B,差异均有统计学意义(P<0.05).三组成瘤率均为100％,miRNA-144过表达组、阴性对照组和空白对照组三组肿瘤体积、肠道菌群数量、肿瘤组织miRNA-144表达水平和肿瘤组织TLR4和NF-κB p65蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中miRNA-144过表达组肿瘤体积、肠道菌群数量、肿瘤组织TLR4和NF-κB p65明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),肿瘤组织miRNA-144表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P0.05).结论 miRNA-144在原发性肝癌中低表达,过表达miRNA-144可明显抑制裸鼠肿瘤形成,影响肠道菌群,可能与降低TLR4和NF-κB p65表达相关.
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