【摘 要】
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目的 构建人微小RNA145(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pPG-miR-EGFP载
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院外科,华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科,华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室
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目的 构建人微小RNA145(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pPG-miR-EGFP载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-145表达水平,黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的pPG-miR145-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配;重组质粒转染SGC-7901细胞后,miR-145表达分别上调20.45倍(P＜0.01),细胞黏附能力分别下降51.5%(P＜0.01),细胞侵袭能力分别下降30.4%(P＜0.01).结论 成功构建人pre-miR-145真核表达载体,转染胃癌细胞过表达后,能抑制癌细胞的游走和侵袭能力.
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