抗siRNA的GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定细胞系的构建

来源 :生物技术通讯 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wangxiao8910

【摘要】

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目的：构建GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法：设计Polo样激酶1（Plk1）siRNA序列及相对应的同义突变引物，并利用二次PCR方法扩增Plk1基因，定向克隆到pRex-EGFP-IRES-

【作者】

：

李伟李峰生于楠刘萱李平江其生曹诚

【机构】

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军事医学科学院生物工程研究所,第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室

【出处】

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生物技术通讯

【发表日期】

：

2015年2期

【关键词】

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PLK1 抗siRNA 同义突变稳定细胞系 Polo-like kinase 1 anti-siRNA synonymous mutation stab

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目的：构建GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法：设计Polo样激酶1（Plk1）siRNA序列及相对应的同义突变引物，并利用二次PCR方法扩增Plk1基因，定向克隆到pRex-EGFP-IRES-Hygro载体中，构建pRex-EGFP-rPlk1-IRES-Hygro表达载体；利用逆转录病毒感染的方法，构建HeLa/GFP-rPlk1稳定细胞系；利用免疫印迹及激光共聚焦显微镜，验证Plk1 siRNA的干扰效果及稳定细胞系的构建。结果：双酶切鉴定和测序结果表明构建的pRex-EGFP

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