观察富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5(LGR5)基因沉默对具有"干性"结肠癌球囊细胞生物学行为影响。
方法采用RNA干扰技术沉默LGR5基因表达。利用脂质体Lipofectamine RNAi MAX将LGR5小干扰RNA (LGR5-siRNA)转染至HT29结肠癌球囊细胞，而转染对照siRNA细胞和未转染细胞分别作为阴性对照组和空白对照组。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测转染48 h后球囊细胞LGR5 mRNA和蛋白表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)法转染1、2、3、4 d球囊细胞增殖能力，球囊形成实验、Transwell小室实验、流式细胞术检测转染48 h后细胞自我更新、侵袭能力和细胞周期。
结果转染48 h后，实验组LGR5 mRNA表达量(0.32±0.02)较空白对照组(1.00±0.16)和阴性对照组(0.99±0.12)明显下降(P＝0.000)，蛋白表达亦显著下调(P＝0.000)；CCK-8实验结果显示，实验组细胞增殖能力明显减弱，4 d时空白对照组、阴性对照组和实验组吸光度(A)值分别为0.540±0.010、0.528±0.016、0.390±0.022(P＝0.000)；球囊形成实验结果显示实验组形成子代球囊数目[(21.33±2.08)个]明显少于空白对照组[(72.33±3.06)个]和阴性对照组[(70.67±2.52)个，P＝0.000]；流式细胞术检测结果显示实验组细胞明显阻滞于G0/G1期(P＝0.000)；Transwell小室实验结果显示，实验组穿膜细胞数[(35.60±6.74)个]较空白对照组[(86.47±7.85)个]和阴性对照组[(83.53±8.58)个]明显减少(P＝0.000)。
结论LGR5基因沉默可抑制结肠癌球囊细胞增殖、自我更新及侵袭，LGR5对结肠癌干细胞生物学行为有重要调控作用。