【摘 要】
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目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人肝癌细胞的抑制作用及对相关生长调控基因的调节.方法:构建pSilencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒,转染人肝癌细胞株SMMC 7721,采
【机 构】
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吉林大学第一医院消化科,锦州市第二医院骨科
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目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人肝癌细胞的抑制作用及对相关生长调控基因的调节.方法:构建pSilencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒,转染人肝癌细胞株SMMC 7721,采用MTT法观察重组质粒对肝癌细胞的生长抑制,RT-PCR和Western blot及免疫组化法分别观察STAT3基因和蛋白水平的变化,同时检测survivin,c-myc,VEGF,p53,caspase3生长调控基因的mRNA,并用流式细胞技术(FCM)及AO/EB染色方法观察细胞凋亡.结果:pSilencer 3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒对肝癌细胞的生长有抑制作用,实验组48h和72h抑制率分别为59.32%,76.49%,与空白组及阴性组细胞相比有显著性差异(P<0.01);在重组质粒组,STAT3基因mRNA及蛋白水平表达降低,surviving,VEGF的mRNA表达下调,p53,caspase3的mRNA表达上调(P<0.01),c-myc的mRNA表达却无明显改变;重组质粒可诱导SMMC 7721细胞凋亡,凋亡率达21.6%(P<0.01),细胞周期分析显示细胞阻滞于G2期.结论:pSilencer3.0-H1-STAT3-siRNA可能通过下调基因survivin和VEGF mRNA表达,上调p53和caspase3 mRNA表达来抑制STAT3基因在人肝癌细胞中的表达.
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