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目的 通过基因合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子(CM-HBX),再以慢病毒感染的方式构建稳定表达核心启动子的L-02细胞株,建立肝癌发生的细胞模型.方法 通过基因合成的方法,合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子,在N末端加上标记序列HBX-Flag,分别双酶切pLenO-RTP载体和pUC57-CM-HBX,纯化酶切产物后进行定向连接,得到重组质粒pLenO-RTP-CM-HBX.钙转法将重组质粒转入293T细胞进行病毒包装然后转染肝细胞.噻唑蓝(MTT)比色法检测转染后细胞增殖能力的变化,Western blot法检测HBX-Flag在慢病毒感染后L-02中的表达以及转染后细胞内S期激酶相关蛋白2(Skp2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、p21、p53的表达的变化.结果 构建pLenO-RTP-CM-HBX核心启动子慢病毒载体可以效率较高地感染L-02(＞95％),并在细胞内转录、翻译、合成HBX-Flag,随着培养时间的延长,红色荧光强度无明显变化；同空载组和空白对照组比较,联合突变组L-02的增殖能力明显增强(P＜0.05),Skp2、PCNA表达增加,p21、p53表达降低(P＜0.05).而空载组和空白对照组的各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢病毒载体pLenO-RTP-CM-HBX核心启动子成功转染L-02,转染后的L-02具有癌变倾向。