【摘 要】
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为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性,本文对MgCl浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步
【机 构】
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北京农学院生物技术系(北京)新疆农业大学园艺学院(乌鲁木齐)北京农学院植物科技系(北京)
【出 处】
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全国南瓜营养、保健功能与产业发展研讨会
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为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性,本文对MgCl<,2>浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究.最终优化的南瓜RAPD反应体系为25μl反应液中:10×反应buffer(100mmol/L Tris-HCL,100 mmol/L KCL,80mmol/L (NH<,4>)<,2>SO<,4>,Ph9.0,NP-40)2.5μl,3mmol/L MgCl<,2>,0.2mmol/L dNTPs,Taq酶1.0U,引物15ng/μl,DNA模板10ng/μl.本研究最终确立的PCR反应程序为:94℃预变性5min,然后按94℃变性30s,37℃退火30s,72℃延伸90s,进行40个循环,最后72℃延伸5min.在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段.
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