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摘要：目的 观察活血化瘀中药丹参、川芎、姜黄对兔动脉粥样硬化（AS）的影响及其作用机制。方法 将家兔按血脂水平随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、丹参组、川芎组及姜黄组。其中空白组给予普通饲料，其余各组饲喂高脂饲料。高脂饲料喂养期间各组动物分别给予相应剂量的药物。给药第12周后，测定血脂水平、血清抗氧化能力、凝血及血液流变学指标，并观察动脉斑块形成程度。结果 川芎与丹参可显著降低AS兔主动脉弓部斑块校正面积与最大斑块厚度。川芎、丹参、姜黄均可降低AS兔血小板最大聚集率，丹参可显著降低AS兔低切全血黏度，川芎可降低AS兔血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及非高密度脂蛋白胆固醇水平。川芎、丹参可降低血清脂质过氧化产物丙二醛水平，丹参还可升高超氧化物歧化酶的活性。结论 活血化瘀中药具有较好的抑制AS形成的作用，与其降血脂、提高抗氧化能力等作用有关。
关键词：活血化瘀；丹参；川芎；姜黄；兔；动脉粥样硬化；脂质调节
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0035-03
在我国，随着人民生活水平的提高，人们的膳食结构以及生活方式的改变在一定程度上影响着动脉粥样硬化（AS）的发生，表现为AS发病率的上升及发病人群年轻化趋势，因此，对AS防治日益受到重视。
中医理论多从痰、瘀、毒来解释AS病机，认为AS的发病与痰浊、血瘀的病理变化密切相关[1-2]。因此本研究以兔AS模型为切入点，探讨活血化瘀中药川芎、丹参、姜黄对AS斑块形成的影响及其可能的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
日本大耳白兔，雄性，体质量1.8～2.2 kg，清洁级，北京医科大学医学部实验动物中心提供，许可证编号SCXK（京）2006- 0008。
1.2 药物
丹参、川芎、姜黄，均购自北京人卫中药饮片厂。采用醇提法制备相应的提取物，提取率分别为29.22%、5.17%、12.25%，北京中研同仁堂医药研发有限公司制剂室提供。
1.3 试剂
胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）测定试剂盒，北京中生生物工程技术公司。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。肝素钠，国药集团化学试剂有限公司。其他试剂均为市售分析纯。
1.4 仪器
BT-300型血液流变测试仪（北京博莱特医药技术有限公司）；LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析仪（北京世帝科学仪器公司）；Sartorious BT 124S电子精密天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；切片机、包埋机、展片机、烤片机（德国Leica）；光学显微镜（日本 Olympus）；半自动生化测定仪（Microlab 300，Vital Scientific Inc.）。Image-Pro Plus 6.0专业图像分析软件。
2 实验方法
2.1 家兔动脉粥样硬化模型的建立
参考文献[3]方法建立兔AS模型。兔高脂饲料配方：1%胆固醇、10%蛋黄粉、2%猪油、87%基础饲料混合制成。高脂饲料饲喂12周后可形成兔AS模型。
2.2 分组与给药
动物适应性喂养1周，禁食12 h后，耳缘静脉采血，测定血清中CHO水平，按CHO水平随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组（0.66 mg/kg）、川芎组（1.20 g原药材/kg）、丹参组（2.00 g原药材/kg）、姜黄组（1.20 g原药材/kg），每组12只（下述实验结果中样本例数以实测数为准）。阿托伐他汀组给药剂量为人临床用药等效剂量，各中药给药组剂量为2005年版《中华人民共和国药典》中规定人临床用药上限剂量等效剂量的2倍。其中空白组动物给予普通饲料，其余各组动物饲喂高脂饲料。高脂饲料喂养期间各组动物按体质量分别灌胃给予相应剂量的药物，给药容积为2 mL/kg，共给药12周。
2.3 动脉粥样硬化斑块形成的组织学形态分析
兔主动脉弓根部病理取材，甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，Image-Pro Plus病理图像分析系统对主动脉病理改变进行分析，分别测定斑块面积（PA）、血管横截面积（CVA）、最大斑块厚度（MPT），并计算校正斑块面积（PA/CVA）。
2.4 二磷酸腺苷诱导血小板最大聚集率与全血血液流变学测定
耳缘动脉取血，枸橼酸钠抗凝，离心制备富血小板血浆与贫血小板血浆，测定二磷酸腺苷（ADP）诱导血小板最大聚集率。全血肝素抗凝，血液流变仪测定高、中、低切变率全血黏度。
2.5 血脂及血清抗氧化能力测定
末次给药前实验动物禁食不禁水16 h，给药后1 h，耳缘静脉采血，离心制备血清，按试剂盒说明书进行血脂相关指标CHO、HDL-C、LDL-C、TG、非高密度脂蛋白胆固醇（non-HDL-C）水平的测定，并对血清MDA含量及SOD活性进行测定。
3 统计学方法
运用SPSS10.0统计软件，数据以—x±s表示，采用方差分析法，对多组间的实验数据进行统计学分析。P<0.05为差异有统计学意义。
4 结果（见表1～表5）
5 讨论
高胆固醇血症与AS过程中的高凝状态以及氧化损伤关系密切。LDL是AS形成的强刺激物，而氧化型LDL（ox-LDL）或轻微修饰的LDL（mm-LDL）较单纯LDL更具致病性[4]。因此在AS病变过程中，高胆固醇是其主要致病因素，各种氧化损伤是发病的重要诱因，而且二者互相影响，加速了病情的发展[5]。故在高脂血症的治疗中，不仅要加强血脂的调节，而且应重视提升机体的抗氧化能力。此外，血栓形成也是AS发生的重要机制之一。血小板分泌的血小板源性细胞生长因子可促进血管平滑肌细胞迁移、增殖，在AS发展过程中起着十分重要的作用[6]。研究发现，高脂血症患者的血浆β-血小板球蛋白及血小板因子含量增加，血小板聚集性增强，表明高脂血症患者的血小板活化加强[7]。因此，降低血小板活性，抑制血栓形成，可显著降低AS的发生以及AS病变过程中血栓栓塞的风险。AS病变易发生在动脉分支处，这一规律与该部位的解剖学和血流动力学特点有关[8]。通过改善AS患者血液流变学的相关指标，可显著降低AS病变引起的冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的发生率[9-10]。AS的这些发病机制在中医理论中可归结为痰瘀交阻，损伤脉络，最终形成痰瘀相互交夹的病理状态[11]。因此，AS从瘀论治已成为值得深入研究的重要课题。研究表明，活血化瘀类中药川芎、丹参、姜黄及其有效成分具有较好的抗AS作用[12-14]。故本实验研究以川芎、丹参与姜黄作为AS活血化瘀治法的代表中药，并从AS发病过程中的血脂紊乱、氧化损伤、血小板聚集、血液流变学改变等危险因素着手，初步观察活血化瘀治法治法中药对AS的干预作用。 研究结果表明，经过长期高脂饲料饲喂，家兔主动脉弓根部可形成明显的AS斑块。模型组兔血脂相关指标CHO、LDL-C及non-HDL-C水平明显升高；血清脂质过氧化产物MDA含量增高，而SOD活性降低；血小板最大聚集率及血液黏度显著升高。而与模型组比较，活血化瘀类中药可以显著改善AS病理改变，其中川芎与丹参可降低斑块校正面积及MPT。在调节血脂代谢方面，川芎可降低血清CHO、LDL-C及non-HDL-C水平。与模型组比较，川芎、丹参可显著提升AS兔的抗氧化能力，其中川芎、丹参可降低血清脂质过氧化产物MDA水平，而丹参还可增强抗氧化酶SOD的活性。此外，川芎、丹参、姜黄均可降低血小板最大聚集率，提示三者具有抑制AS高凝状态下血小板聚集活性升高的作用。血脂的升高往往会导致血液黏度的增加，丹参可显著降低AS兔全血低切变率，具有一定程度的改善微循环的作用。
综上所述，活血化瘀类中药可通过降血脂、抗氧化、抑制血小板聚集、改善血液流变学等作用发挥其抗AS作用，显示出活血化瘀中药抗AS的优良特点。
参考文献：
[1] 邵明义，施斌，郑玉.痰瘀同治法在高脂血症治疗中的应用[J].河南中医，2005，25（3）：59-60.
[2] 马希英，李军.高脂血症从瘀论治四法[J].吉林中医药，2004，24（11）：16-17.
[3] 徐叔云，卞如濂.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2003：1202.
[4] Orem C， Orem A， Uydu HA， et al. The effects of lipid-lowering therapy on low-density lipoprotein auto-antibodies：relationship with low-density lipoprotein oxidation and plasma total antioxidant status[J]. Coron Artery Dis，2002，13（1）：65-71.
[5] 李芹，荆清.一氧化氮和氧化低密度脂蛋白相互作用及其与动脉粥样硬化的关系[J].国外医学：心血管疾病分册，1999，26（1）：23-24.
[6] 蔡海江.动脉粥样硬化的基础与临床[M].南京：江苏科学技术出版社， 1999：161-163.
[7] Lacoste L， Lam JY， Hung J， et al. Hyperlipidemia and coronary disease：correlation of the increased thrombogenic potential with cholesterol reduction[J]. Circulation，1995，92（11）：3172-3177.
[8] 孙立涛，田家玮，马娜.多普勒超声对兔动脉硬化的血流动力学与流变学研究[J].中国医学影像技术，2005，21（6）：843-845.
[9] 王玉萍，路浩，徐岷.动脉粥样硬化性缺血性脑卒中血液流变学及相关危险因素[J].中国实用神经疾病杂志，2007，10（3）：75-76.
[10] 王进，董长林，冯娜，等.冠心病患者颈动脉斑块形成与血液流变学指标关系的探讨[J].国际检验医学杂志，2009，30（4）：382-386.
[11] 于俊生，陈兆昌.动脉粥样硬化从痰瘀毒论治探讨[J].山东中医杂志， 2002，21（8）：451-452.
[12] 孔祥明.活血化瘀药对动脉粥样硬化形成机制的干预[J].国外医学：中医中药分册，2002，24（4）：195-198.
[13] 蔡大勇，梅家俊，陈振发，等.川芎调节血脂防治家兔动脉粥样硬化症的研究[J].湖北中医杂志，2001，23（10）：3-5.
[14] 彭小春，马红莺，尹刚，等.川芎嗪抗动脉粥样硬化机制的研究[J].时珍国医国药，2010，21（5）：1130-1131.
（收稿日期：2011-07-18，编辑：华强）
关键词：活血化瘀；丹参；川芎；姜黄；兔；动脉粥样硬化；脂质调节
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0035-03
在我国，随着人民生活水平的提高，人们的膳食结构以及生活方式的改变在一定程度上影响着动脉粥样硬化（AS）的发生，表现为AS发病率的上升及发病人群年轻化趋势，因此，对AS防治日益受到重视。
中医理论多从痰、瘀、毒来解释AS病机，认为AS的发病与痰浊、血瘀的病理变化密切相关[1-2]。因此本研究以兔AS模型为切入点，探讨活血化瘀中药川芎、丹参、姜黄对AS斑块形成的影响及其可能的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
日本大耳白兔，雄性，体质量1.8～2.2 kg，清洁级，北京医科大学医学部实验动物中心提供，许可证编号SCXK（京）2006- 0008。
1.2 药物
丹参、川芎、姜黄，均购自北京人卫中药饮片厂。采用醇提法制备相应的提取物，提取率分别为29.22%、5.17%、12.25%，北京中研同仁堂医药研发有限公司制剂室提供。
1.3 试剂
胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）测定试剂盒，北京中生生物工程技术公司。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。肝素钠，国药集团化学试剂有限公司。其他试剂均为市售分析纯。
1.4 仪器
BT-300型血液流变测试仪（北京博莱特医药技术有限公司）；LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析仪（北京世帝科学仪器公司）；Sartorious BT 124S电子精密天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；切片机、包埋机、展片机、烤片机（德国Leica）；光学显微镜（日本 Olympus）；半自动生化测定仪（Microlab 300，Vital Scientific Inc.）。Image-Pro Plus 6.0专业图像分析软件。
2 实验方法
2.1 家兔动脉粥样硬化模型的建立
参考文献[3]方法建立兔AS模型。兔高脂饲料配方：1%胆固醇、10%蛋黄粉、2%猪油、87%基础饲料混合制成。高脂饲料饲喂12周后可形成兔AS模型。
2.2 分组与给药
动物适应性喂养1周，禁食12 h后，耳缘静脉采血，测定血清中CHO水平，按CHO水平随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组（0.66 mg/kg）、川芎组（1.20 g原药材/kg）、丹参组（2.00 g原药材/kg）、姜黄组（1.20 g原药材/kg），每组12只（下述实验结果中样本例数以实测数为准）。阿托伐他汀组给药剂量为人临床用药等效剂量，各中药给药组剂量为2005年版《中华人民共和国药典》中规定人临床用药上限剂量等效剂量的2倍。其中空白组动物给予普通饲料，其余各组动物饲喂高脂饲料。高脂饲料喂养期间各组动物按体质量分别灌胃给予相应剂量的药物，给药容积为2 mL/kg，共给药12周。
2.3 动脉粥样硬化斑块形成的组织学形态分析
兔主动脉弓根部病理取材，甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，Image-Pro Plus病理图像分析系统对主动脉病理改变进行分析，分别测定斑块面积（PA）、血管横截面积（CVA）、最大斑块厚度（MPT），并计算校正斑块面积（PA/CVA）。
2.4 二磷酸腺苷诱导血小板最大聚集率与全血血液流变学测定
耳缘动脉取血，枸橼酸钠抗凝，离心制备富血小板血浆与贫血小板血浆，测定二磷酸腺苷（ADP）诱导血小板最大聚集率。全血肝素抗凝，血液流变仪测定高、中、低切变率全血黏度。
2.5 血脂及血清抗氧化能力测定
末次给药前实验动物禁食不禁水16 h，给药后1 h，耳缘静脉采血，离心制备血清，按试剂盒说明书进行血脂相关指标CHO、HDL-C、LDL-C、TG、非高密度脂蛋白胆固醇（non-HDL-C）水平的测定，并对血清MDA含量及SOD活性进行测定。
3 统计学方法
运用SPSS10.0统计软件，数据以—x±s表示，采用方差分析法，对多组间的实验数据进行统计学分析。P<0.05为差异有统计学意义。
4 结果（见表1～表5）
5 讨论
高胆固醇血症与AS过程中的高凝状态以及氧化损伤关系密切。LDL是AS形成的强刺激物，而氧化型LDL（ox-LDL）或轻微修饰的LDL（mm-LDL）较单纯LDL更具致病性[4]。因此在AS病变过程中，高胆固醇是其主要致病因素，各种氧化损伤是发病的重要诱因，而且二者互相影响，加速了病情的发展[5]。故在高脂血症的治疗中，不仅要加强血脂的调节，而且应重视提升机体的抗氧化能力。此外，血栓形成也是AS发生的重要机制之一。血小板分泌的血小板源性细胞生长因子可促进血管平滑肌细胞迁移、增殖，在AS发展过程中起着十分重要的作用[6]。研究发现，高脂血症患者的血浆β-血小板球蛋白及血小板因子含量增加，血小板聚集性增强，表明高脂血症患者的血小板活化加强[7]。因此，降低血小板活性，抑制血栓形成，可显著降低AS的发生以及AS病变过程中血栓栓塞的风险。AS病变易发生在动脉分支处，这一规律与该部位的解剖学和血流动力学特点有关[8]。通过改善AS患者血液流变学的相关指标，可显著降低AS病变引起的冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的发生率[9-10]。AS的这些发病机制在中医理论中可归结为痰瘀交阻，损伤脉络，最终形成痰瘀相互交夹的病理状态[11]。因此，AS从瘀论治已成为值得深入研究的重要课题。研究表明，活血化瘀类中药川芎、丹参、姜黄及其有效成分具有较好的抗AS作用[12-14]。故本实验研究以川芎、丹参与姜黄作为AS活血化瘀治法的代表中药，并从AS发病过程中的血脂紊乱、氧化损伤、血小板聚集、血液流变学改变等危险因素着手，初步观察活血化瘀治法治法中药对AS的干预作用。 研究结果表明，经过长期高脂饲料饲喂，家兔主动脉弓根部可形成明显的AS斑块。模型组兔血脂相关指标CHO、LDL-C及non-HDL-C水平明显升高；血清脂质过氧化产物MDA含量增高，而SOD活性降低；血小板最大聚集率及血液黏度显著升高。而与模型组比较，活血化瘀类中药可以显著改善AS病理改变，其中川芎与丹参可降低斑块校正面积及MPT。在调节血脂代谢方面，川芎可降低血清CHO、LDL-C及non-HDL-C水平。与模型组比较，川芎、丹参可显著提升AS兔的抗氧化能力，其中川芎、丹参可降低血清脂质过氧化产物MDA水平，而丹参还可增强抗氧化酶SOD的活性。此外，川芎、丹参、姜黄均可降低血小板最大聚集率，提示三者具有抑制AS高凝状态下血小板聚集活性升高的作用。血脂的升高往往会导致血液黏度的增加，丹参可显著降低AS兔全血低切变率，具有一定程度的改善微循环的作用。
综上所述，活血化瘀类中药可通过降血脂、抗氧化、抑制血小板聚集、改善血液流变学等作用发挥其抗AS作用，显示出活血化瘀中药抗AS的优良特点。
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[9] 王玉萍，路浩，徐岷.动脉粥样硬化性缺血性脑卒中血液流变学及相关危险因素[J].中国实用神经疾病杂志，2007，10（3）：75-76.
[10] 王进，董长林，冯娜，等.冠心病患者颈动脉斑块形成与血液流变学指标关系的探讨[J].国际检验医学杂志，2009，30（4）：382-386.
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[14] 彭小春，马红莺，尹刚，等.川芎嗪抗动脉粥样硬化机制的研究[J].时珍国医国药，2010，21（5）：1130-1131.
（收稿日期：2011-07-18，编辑：华强）