论文部分内容阅读
【摘要】目的分析病理技术中无醛固定液的应用价值。方法选择我院临床送检的组织活体标本61例进行研究，每种组织分别取2块，采用甲醛固定液和GS无醛固定液固定组织，进行免疫组化染色，观察免疫组化染色效果。结果采用传统甲醛固定液固定的一组，液面较浑浊，且组织上浮，而采用GS无醛固定液固定的一组，液面清亮，组织沉底，且变硬、变白，具有较好的连续性；免疫组化染色效果显示，无醛固定液的标本组织细胞抗原性保存较好，背景清晰，且阳性结果定位较准确。结论无醛固定液的免疫组化染色效果与甲醛固定液基本一致，在某些组织中还优于甲醛固定液，同时固定有效时间要长于甲醛固定液，因此在病理检查中可用无醛固定液代替甲醛固定液。
【关键词】病理技术；无醛固定液；甲醛固定液
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.060文章编号：1004-7484（2014）-05-2453-02在病理诊断中传统应用较多的是甲醛固定液，但是甲醛固定液的毒性较大，对人体危害严重。无醛固定液是近年来病理诊断中逐渐应用的新型固定液，其免疫组化染色效果较好，且能保证组织细胞的完整性，是病理诊断中较为理想的固定液。为了探讨无醛固定液在病理技术中的应用价值，本文选择我院临床送检的61例组织标本，分别用甲醛固定液和无醛固定液固定后，对免疫组化染色效果进行对比，报告如下：
1资料和方法
1.1一般资料选择我院2009年——2012年临床送检的组织活体标本61例进行研究，其中11例结肠癌组织，9肺癌组织，13例乳腺癌组织，12例淋巴癌组织，10例卵巢癌组织，6例前列腺癌组织。
1.2方法
1.2.1试剂每种组織分别取2块，组织大小为2×1×0.2cm，将每种组织分别纳入两组中，采用甲醛固定液和GS无醛固定液固定组织。试剂：GS无醛固定液、脱水液、浸蜡液、无苯透明液全部由（哈尔滨格林标本技术开发有效公司）提供。甲醛、二甲苯试剂则由（北京益利精细化学品有限公司）提供。另外，在试验中所需的RPR、HER-2、CAl99、LCA、CD20、CD45RO、EGFR、CK、p53、CAl25等即用型单克隆抗体由（福州迈新生物技术开发有限公司）提供。
1.2.2固定方法①GS无醛固定液固定方法：无醛固定液Ⅰ和无醛固定液Ⅱ分别固定1h和3h，之后用脱水液脱水1h，无苯透明液透明1.5h，浸蜡液1.5h，石蜡包埋，常规切片，切片厚度为5μm。②甲醛固定：采用4%的甲醛液将组织分别固定2h，之后用80%的乙醇脱水1h，无水乙醇脱水1h，二甲苯透明1.5h，浸蜡液1h，石蜡包埋后常规切片，厚度为5μm。
1.2.3免疫组化染色将两种固定液固定的切片各取一张，切片先进行脱蜡，然后用3%的H2O2室温孵育10min，用蒸馏水洗3次，每次3min，用高压锅修复，温度为140℃，时间为2.5min，之后PBS洗3次，每次5min，加抗工作液1滴，在37℃下孵育2h，再次PBS洗3次，每次5min，加入Max VisionTM试剂，37℃下孵育30min，再次PBS洗3次，DAB显色，用蒸馏水冲洗，苏木精复染核1min后，分化返蓝，乙醇脱水，二甲苯透明，用中性树胶封固。根据组织标本进行免疫组化染色。对同一种组织采用不同固定液固定方法得到切片的免疫组化染色效果进行对比。
2结果
经对比，采用传统甲醛固定液固定的一组，液面较浑浊，且组织上浮，而采用GS无醛固定液固定的一组，液面清亮，组织沉底，且变硬、变白，具有较好的连续性；免疫组化染色效果显示，无醛固定液的标本组织细胞抗原性保存较好，背景清晰，且阳性结果定位较准确。
3讨论
在病理诊断中免疫组化染色是非常重要的工具，当前大部分的病理诊断均需要通过免疫组化染色。在以往免疫组化染色过程中，结果不稳定情况经常出现，近年来随着免疫试剂质量的提高和免疫组化染色操作自动化的发展，该状况有了一定改善，但是结果不稳定情况依然存在。对免疫组化染色结果稳定性产生影响的重要方面就是组织的固定质量，该步骤是实验室检测中的最初的一步，也是最关键的一步，通过对病理切片制作质量的影响来影响免疫组化的结果，固定液是该操作中必不可少的，而固定液的质量和性质对切片质量产生影响[1]。
在以往病理组织切片制作过程中应用较多的是甲醛固定液，除了具有较高的毒性之外，它具有较强的渗透性，组织收缩小，固定均匀，廉价以及保存组织结构好的优点，因此在病理诊断中应用较多，但是甲醛固定液也存在较大的缺点：首先其挥发性较强，保存要求高，具有强烈的腐蚀性和刺激性，释放到空气中对环境的污染严重，根据相关的医学研究，人体直接接触甲醛可能会引发湿疹、过敏和皮炎，另外众所周知，甲醛具有致癌性，人长期生活在甲醛环境中，则罹患各种癌症和呼吸道疾病的可能性增高；甲醛的存放要求高，当存放时间够长，则会产生白色沉淀，在标本制作中应用会影响固定效果；甲醛氧化活性较高，容易氧化为甲酸，导致整个溶液呈酸性，固定后标本也变为酸性，在细胞核染色时，对其效果产生影响，同时在固定肝、脾等的陈旧组织时，甲醛容易形成甲醛色素，与含铁血黄色混合，直接影响到病理诊断效果；甲醛固定液用完之后的处理难度较大，需要特殊处理，废液不能直接从下水管道排出，处理成本较高[2]。
鉴于甲醛固定液存在的缺陷，在医学研究中，研究人员在不断寻找甲醛固定液的替代品，我国研究人员经过长期的研究，研制出了GS无醛固定液，该固定液最明显的特点就是环保，除了无色、无刺激性、低挥发性、对环境危害较小之外，还具有如下优点：具有较强的渗透性，有效缩短了切片制作中脱水时间；具有较好的固定、脱水、脱脂、硬化等作用，减少了组织在制作中出现收缩、空泡、核固缩等；除了能保护组织形态学结构之外，还能保证细胞膜的完整性；用无醛固定液制作的标本易于分离，能有效清除脂肪组织，无需过多的清洁；减少了组织中抗原和核酸被破坏；能较为完整的保存RNA和DNA，可清除显示细胞的内部结构，便于进行标本精细化研究；无醛固定液的处理较为简单，以乙醇废液处理方法相似[3]。
在本组研究中，同一标本采用无醛固定液和甲醛固定液，在相同的免疫组化条件下，在免疫组化染色效果中两者基本一致，在部分切片中，无醛固定液组的免疫组化染色效果要优于甲醛固定液组。另外在部分研究中对甲醛固定液和无醛固定液的固定时间进行了研究，当固定时间在30d以内，甲醛固定液与无醛固定液的免疫组化染色效果无差异（p>0.05），但是当固定时间超过60d后，相比于甲醛固定液组，无醛固定液组的免疫组化阳性结果呈现较大的优势（p<0.05），待到两组固定时间均超过120d，则发现免疫染色效果差异无统计学意义（p>0.05），说明了无醛固定液固定时间在120d内不会对免疫组化染色效果产生影响，而甲醛固定液则只在60d内不会对免疫组化染色效果产生影响。
综上所述，无醛固定液的免疫组化染色效果与甲醛固定液基本一致，在某些组织中还优于甲醛固定液，同时固定有效时间要长于甲醛固定液，因此在病理检查中可用无醛固定液代替甲醛固定液。
参考文献
[1]潘黎明.环保型无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色的效果比较[J].现代实用医学，2013，25（5）：583.
[2]田玉旺.GS无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色结果的影响[J].诊断病理学杂，2013，20（6）：363.
[3]谢水强.无醛固定液在病理技术中的应用[J].诊断病病理学杂志，2011，14（2）：34.
【关键词】病理技术；无醛固定液；甲醛固定液
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.060文章编号：1004-7484（2014）-05-2453-02在病理诊断中传统应用较多的是甲醛固定液，但是甲醛固定液的毒性较大，对人体危害严重。无醛固定液是近年来病理诊断中逐渐应用的新型固定液，其免疫组化染色效果较好，且能保证组织细胞的完整性，是病理诊断中较为理想的固定液。为了探讨无醛固定液在病理技术中的应用价值，本文选择我院临床送检的61例组织标本，分别用甲醛固定液和无醛固定液固定后，对免疫组化染色效果进行对比，报告如下：
1资料和方法
1.1一般资料选择我院2009年——2012年临床送检的组织活体标本61例进行研究，其中11例结肠癌组织，9肺癌组织，13例乳腺癌组织，12例淋巴癌组织，10例卵巢癌组织，6例前列腺癌组织。
1.2方法
1.2.1试剂每种组織分别取2块，组织大小为2×1×0.2cm，将每种组织分别纳入两组中，采用甲醛固定液和GS无醛固定液固定组织。试剂：GS无醛固定液、脱水液、浸蜡液、无苯透明液全部由（哈尔滨格林标本技术开发有效公司）提供。甲醛、二甲苯试剂则由（北京益利精细化学品有限公司）提供。另外，在试验中所需的RPR、HER-2、CAl99、LCA、CD20、CD45RO、EGFR、CK、p53、CAl25等即用型单克隆抗体由（福州迈新生物技术开发有限公司）提供。
1.2.2固定方法①GS无醛固定液固定方法：无醛固定液Ⅰ和无醛固定液Ⅱ分别固定1h和3h，之后用脱水液脱水1h，无苯透明液透明1.5h，浸蜡液1.5h，石蜡包埋，常规切片，切片厚度为5μm。②甲醛固定：采用4%的甲醛液将组织分别固定2h，之后用80%的乙醇脱水1h，无水乙醇脱水1h，二甲苯透明1.5h，浸蜡液1h，石蜡包埋后常规切片，厚度为5μm。
1.2.3免疫组化染色将两种固定液固定的切片各取一张，切片先进行脱蜡，然后用3%的H2O2室温孵育10min，用蒸馏水洗3次，每次3min，用高压锅修复，温度为140℃，时间为2.5min，之后PBS洗3次，每次5min，加抗工作液1滴，在37℃下孵育2h，再次PBS洗3次，每次5min，加入Max VisionTM试剂，37℃下孵育30min，再次PBS洗3次，DAB显色，用蒸馏水冲洗，苏木精复染核1min后，分化返蓝，乙醇脱水，二甲苯透明，用中性树胶封固。根据组织标本进行免疫组化染色。对同一种组织采用不同固定液固定方法得到切片的免疫组化染色效果进行对比。
2结果
经对比，采用传统甲醛固定液固定的一组，液面较浑浊，且组织上浮，而采用GS无醛固定液固定的一组，液面清亮，组织沉底，且变硬、变白，具有较好的连续性；免疫组化染色效果显示，无醛固定液的标本组织细胞抗原性保存较好，背景清晰，且阳性结果定位较准确。
3讨论
在病理诊断中免疫组化染色是非常重要的工具，当前大部分的病理诊断均需要通过免疫组化染色。在以往免疫组化染色过程中，结果不稳定情况经常出现，近年来随着免疫试剂质量的提高和免疫组化染色操作自动化的发展，该状况有了一定改善，但是结果不稳定情况依然存在。对免疫组化染色结果稳定性产生影响的重要方面就是组织的固定质量，该步骤是实验室检测中的最初的一步，也是最关键的一步，通过对病理切片制作质量的影响来影响免疫组化的结果，固定液是该操作中必不可少的，而固定液的质量和性质对切片质量产生影响[1]。
在以往病理组织切片制作过程中应用较多的是甲醛固定液，除了具有较高的毒性之外，它具有较强的渗透性，组织收缩小，固定均匀，廉价以及保存组织结构好的优点，因此在病理诊断中应用较多，但是甲醛固定液也存在较大的缺点：首先其挥发性较强，保存要求高，具有强烈的腐蚀性和刺激性，释放到空气中对环境的污染严重，根据相关的医学研究，人体直接接触甲醛可能会引发湿疹、过敏和皮炎，另外众所周知，甲醛具有致癌性，人长期生活在甲醛环境中，则罹患各种癌症和呼吸道疾病的可能性增高；甲醛的存放要求高，当存放时间够长，则会产生白色沉淀，在标本制作中应用会影响固定效果；甲醛氧化活性较高，容易氧化为甲酸，导致整个溶液呈酸性，固定后标本也变为酸性，在细胞核染色时，对其效果产生影响，同时在固定肝、脾等的陈旧组织时，甲醛容易形成甲醛色素，与含铁血黄色混合，直接影响到病理诊断效果；甲醛固定液用完之后的处理难度较大，需要特殊处理，废液不能直接从下水管道排出，处理成本较高[2]。
鉴于甲醛固定液存在的缺陷，在医学研究中，研究人员在不断寻找甲醛固定液的替代品，我国研究人员经过长期的研究，研制出了GS无醛固定液，该固定液最明显的特点就是环保，除了无色、无刺激性、低挥发性、对环境危害较小之外，还具有如下优点：具有较强的渗透性，有效缩短了切片制作中脱水时间；具有较好的固定、脱水、脱脂、硬化等作用，减少了组织在制作中出现收缩、空泡、核固缩等；除了能保护组织形态学结构之外，还能保证细胞膜的完整性；用无醛固定液制作的标本易于分离，能有效清除脂肪组织，无需过多的清洁；减少了组织中抗原和核酸被破坏；能较为完整的保存RNA和DNA，可清除显示细胞的内部结构，便于进行标本精细化研究；无醛固定液的处理较为简单，以乙醇废液处理方法相似[3]。
在本组研究中，同一标本采用无醛固定液和甲醛固定液，在相同的免疫组化条件下，在免疫组化染色效果中两者基本一致，在部分切片中，无醛固定液组的免疫组化染色效果要优于甲醛固定液组。另外在部分研究中对甲醛固定液和无醛固定液的固定时间进行了研究，当固定时间在30d以内，甲醛固定液与无醛固定液的免疫组化染色效果无差异（p>0.05），但是当固定时间超过60d后，相比于甲醛固定液组，无醛固定液组的免疫组化阳性结果呈现较大的优势（p<0.05），待到两组固定时间均超过120d，则发现免疫染色效果差异无统计学意义（p>0.05），说明了无醛固定液固定时间在120d内不会对免疫组化染色效果产生影响，而甲醛固定液则只在60d内不会对免疫组化染色效果产生影响。
综上所述，无醛固定液的免疫组化染色效果与甲醛固定液基本一致，在某些组织中还优于甲醛固定液，同时固定有效时间要长于甲醛固定液，因此在病理检查中可用无醛固定液代替甲醛固定液。
参考文献
[1]潘黎明.环保型无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色的效果比较[J].现代实用医学，2013，25（5）：583.
[2]田玉旺.GS无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色结果的影响[J].诊断病理学杂，2013，20（6）：363.
[3]谢水强.无醛固定液在病理技术中的应用[J].诊断病病理学杂志，2011，14（2）：34.