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摘 要：本实验采用高效液相色谱法对复方依托红霉素洗剂中的依托红霉素的进行了含量测定。方法：采用C18 色谱柱，10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相，检测波长为205nm，流速为1.0ml/min。依托红霉素在0.1～2.5mg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99995）。依托红霉素平均回收率分别为99.5%。结论：本法简便、准确，可用于复方依托红霉素洗剂中依托红霉素的含量测定。
关键词：复方依托红霉素洗剂；含量；测定
依托红霉素为红霉素丙酸酯的十二烷基硫酸盐，中文别名为红霉素丙酸脂十二烷基硫酸盐、红霉素硫酸月桂酸酯、无味红霉素干糖浆、红霉素丙酸酯十二烷基硫酸鹽、无味红霉素。依托红霉素对葡萄球菌属、各组链球菌和革兰阳性杆菌均具抗菌活性。依托红霉素系抑菌剂，但在高浓度时对某些细菌也具杀菌作用。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等，该方法已成为化学、医学、工业和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。本实验采用高效液相色谱法对复方依托红霉素洗剂中的依托红霉素的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：赛默飞Spectronic 200可见分光光度计（百道亨仪器设备（北京）有限公司）；Agilent 1260 液相色谱仪（上海魁元科学仪器有限公司）；HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三频恒温数控超声波清洗器（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；Sail（赛尔）1000液相色谱仪（月旭科技（上海）股份有限公司）；DTA-27多功能静音型台式超声波清洗机（鼎泰（湖北）生化科技设备制造公司）。
1.2色谱柱：迪马C18钻石色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品：依托红霉素
1.4试剂：甲醇（武汉强松精细化学品有限公司）、乙腈（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸（上海江莱生物科技有限公司）、十二烷基磺酸钠（武汉强松精细化学品有限公司）、三乙胺（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸二氢钠（上海江莱生物科技有限公司）、氢氧化钠（上海江莱生物科技有限公司）。
2测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。流动相：10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相，检测波长：205nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按依托红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取依托红霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含1.0mg的依托红霉素溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取复方依托红霉素洗剂，精密量取，置10毫升容量瓶内，用流动相定容，摇匀，滤过，即得。
2.4精密度试验
精密吸取10μl依托红霉素对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。
2.5对照品的线性考察
精密称取适量依托红霉素对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，依托红霉素在0.1～2.5mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6阴性溶液的制备
依照处方取除依托红霉素以外的原辅料等，按样品制备工艺制成阴性对照样品，依上述方法测定，结果在依托红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.7重现性试验
称取同一批的复方依托红霉素洗剂样品6份，测定含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.72%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入依托红霉素对照品。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.5%， RSD为0.71%。
2.9样品稳定性试验
取同一批复方依托红霉素洗剂样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定复方依托红霉素洗剂中依托红霉素的RSD=0.83%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.10样品含量测定
测定复方依托红霉素洗剂三批样品中依托红霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.1%、99.8%、100.2%。
3讨论
分别考察0.005 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）-乙腈（54∶46），0.02 mol·L-1磷酸二氢钾（氢氧化钠调pH至6.0）-甲醇（4∶1），10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（50：50：0.1：0.01），乙腈-0.1%磷酸（40：60，每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g），不同比例的流动相，结果以10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相。本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于复方依托红霉素洗剂中依托红霉素的含量测定。
参考文献：
[1]涂国华，钱金强，易阳，季德成，熊建新，丁翠君，钱琴芬，邓素丹，王丽晴.小剂量依托红霉素对哮喘患儿痰液中性粒细胞及血清白介素-8、白介素-17的影响[J].临床儿科杂志.2012（05）
[2]徐红，侯健.高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法[J].计量与测试技术. 2010（02）
[3]钟然，陈画虹.依托红霉素片含量测定方法的改进[J].中国药师.2001（01）
[4]徐红，侯健.高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法[J].计量与测试技术.2010（02）
[5]崔丽君，徐广通，徐惠，许崇娟.反相高效液相色谱二元流动相组分的最佳化研究[J].山东建材学院学报.1993（03）
关键词：复方依托红霉素洗剂；含量；测定
依托红霉素为红霉素丙酸酯的十二烷基硫酸盐，中文别名为红霉素丙酸脂十二烷基硫酸盐、红霉素硫酸月桂酸酯、无味红霉素干糖浆、红霉素丙酸酯十二烷基硫酸鹽、无味红霉素。依托红霉素对葡萄球菌属、各组链球菌和革兰阳性杆菌均具抗菌活性。依托红霉素系抑菌剂，但在高浓度时对某些细菌也具杀菌作用。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等，该方法已成为化学、医学、工业和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。本实验采用高效液相色谱法对复方依托红霉素洗剂中的依托红霉素的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：赛默飞Spectronic 200可见分光光度计（百道亨仪器设备（北京）有限公司）；Agilent 1260 液相色谱仪（上海魁元科学仪器有限公司）；HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三频恒温数控超声波清洗器（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；Sail（赛尔）1000液相色谱仪（月旭科技（上海）股份有限公司）；DTA-27多功能静音型台式超声波清洗机（鼎泰（湖北）生化科技设备制造公司）。
1.2色谱柱：迪马C18钻石色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品：依托红霉素
1.4试剂：甲醇（武汉强松精细化学品有限公司）、乙腈（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸（上海江莱生物科技有限公司）、十二烷基磺酸钠（武汉强松精细化学品有限公司）、三乙胺（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸二氢钠（上海江莱生物科技有限公司）、氢氧化钠（上海江莱生物科技有限公司）。
2测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。流动相：10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相，检测波长：205nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按依托红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取依托红霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含1.0mg的依托红霉素溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取复方依托红霉素洗剂，精密量取，置10毫升容量瓶内，用流动相定容，摇匀，滤过，即得。
2.4精密度试验
精密吸取10μl依托红霉素对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。
2.5对照品的线性考察
精密称取适量依托红霉素对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，依托红霉素在0.1～2.5mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6阴性溶液的制备
依照处方取除依托红霉素以外的原辅料等，按样品制备工艺制成阴性对照样品，依上述方法测定，结果在依托红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.7重现性试验
称取同一批的复方依托红霉素洗剂样品6份，测定含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.72%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入依托红霉素对照品。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.5%， RSD为0.71%。
2.9样品稳定性试验
取同一批复方依托红霉素洗剂样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定复方依托红霉素洗剂中依托红霉素的RSD=0.83%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.10样品含量测定
测定复方依托红霉素洗剂三批样品中依托红霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.1%、99.8%、100.2%。
3讨论
分别考察0.005 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）-乙腈（54∶46），0.02 mol·L-1磷酸二氢钾（氢氧化钠调pH至6.0）-甲醇（4∶1），10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（50：50：0.1：0.01），乙腈-0.1%磷酸（40：60，每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g），不同比例的流动相，结果以10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用10mmol/L十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）为流动相。本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于复方依托红霉素洗剂中依托红霉素的含量测定。
参考文献：
[1]涂国华，钱金强，易阳，季德成，熊建新，丁翠君，钱琴芬，邓素丹，王丽晴.小剂量依托红霉素对哮喘患儿痰液中性粒细胞及血清白介素-8、白介素-17的影响[J].临床儿科杂志.2012（05）
[2]徐红，侯健.高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法[J].计量与测试技术. 2010（02）
[3]钟然，陈画虹.依托红霉素片含量测定方法的改进[J].中国药师.2001（01）
[4]徐红，侯健.高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法[J].计量与测试技术.2010（02）
[5]崔丽君，徐广通，徐惠，许崇娟.反相高效液相色谱二元流动相组分的最佳化研究[J].山东建材学院学报.1993（03）