【摘 要】
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目的 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人转铁蛋白受体(TfR)双融合报告基因表达载体,并进行功能鉴定,为活体光学/磁共振双模式成像提供实验基础.方法 将TfR基因克隆到pEGFP-C1载体,构建重组pEGFP-C1 -TfR质粒.pEGFP-C1 -TfR质粒转染293T细胞48 h后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达情况；通过RT-PCR检测TfR的表达情况；通过激光共聚焦扫描显微镜检测EG
【机 构】
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510630广州,中山大学附属第三医院放射科分子影像学实验室中山大学介入放射学研究所,510630广州,中山大学附属第三医院放射科分子影像学实验室中山大学介入放射学研究所,510630广州,中山大学附
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目的 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人转铁蛋白受体(TfR)双融合报告基因表达载体,并进行功能鉴定,为活体光学/磁共振双模式成像提供实验基础.方法 将TfR基因克隆到pEGFP-C1载体,构建重组pEGFP-C1 -TfR质粒.pEGFP-C1 -TfR质粒转染293T细胞48 h后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达情况；通过RT-PCR检测TfR的表达情况；通过激光共聚焦扫描显微镜检测EGFP-TfR融合蛋白的亚细胞定位；通过Tf探针摄取和竞争实验检测EGFP-TfR融合蛋白的功能.结果 测序结果显示,EGFP-TfR基因序列正确,无突变或缺失.重组质粒转染293T细胞后,荧光显微镜下观察到EGFP的表达；RT-PCR结果显示TfR高效表达；EGFP-TfR融合蛋白主要位于细胞膜,并能够特异介导Tf的内吞.结论 EGFP-TfR双融合报告基因表达载体构建成功,并且能够高效表达发挥各自的功能,可以用于后续的活体光学/磁共振双模式成像。
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