研究微小RNA－22(microRNA－22，miR－22)对造血干细胞TF－1糖代谢的调控作用及其分子机制。
方法低氧条件培养TF－1细胞2 h，通过实时定量PCR(quantitative real－time PCR，qRT－PCR)检测miR－22、葡萄糖转运因子4(glucose transporter 4，G1ut4)和过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferators－activated receptor－γ，PPAR－γ)表达水平。构建miR－22基因的小向导RNA(small guide RNA，sgRNA)载体，利用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)/CRISPR结合核酸内切酶(CRISPR－associated endonumclease，Cas9)CRISPR/Cas9技术对TF－1细胞进行基因敲除。构建过表达载体，导入miR－22基因敲除的细胞后，诱导miR－22过表达，qRT－PCR检测miR－22、Glut4和PPAR－γ的mRNA水平，蛋白质免疫印迹(Western blot)检测Glut4和PPAR－γ蛋白表达水平，以鉴定miR－22表达水平对糖代谢的影响，及其作用机制。
结果与对照组比较，低氧培养2 h后TF－1细胞miR－22的表达量降低(0.015±0.000比0.056±0.001)，Glut4(0.351±0.038比0.152±0.005)和PPAR－γ(0.421±0.017比0.248±0.008)表达升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组比较，miR－22基因敲除后Glut4(0.019±0.000比0.008±0.000)和PPAR－γ(0.038±0.001比0.019±0.000)的表达水平均升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)，过表达miR－22后Glut4(0.005±0.000比0.008±0.000)和PPAR－γ(0.137±0.000比0.019±0.000)的表达水平，差异均有统计学意义降低(均P<0.05)。
结论miR－22可通过下调PPAR－γ的表达对造血细胞TF－1的糖代谢发挥负调控作用。