【摘 要】
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目的构建PLEGFP-BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备.方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片
【机 构】
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四川省泸州医学院附属医院骨科,650032
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目的构建PLEGFP-BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备.方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T-BDNF克隆,对该克隆进行 限制性酶切分析和DNA序列测定;从阳性克隆中获取hBDNF全长编码片段,与真核表达载体PLEGFP质粒连接,构建PLEGFP-BDNF真核表达重组质粒.重组质粒转化大肠杆菌JM109,再经氨苄LB培养基筛选,酶切,
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