【摘 要】
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目的 探讨神经酰胺信号转导通路在胃泌素抑制大肠癌细胞凋亡中的作用及其机制.方法 胃泌素、丙谷胺各设5个浓度梯度,分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 mg/L和8.00、16.00、32.00、64.00、128.00 mg/L.运用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖活力改变,确立5-肽胃泌素和丙谷胺处理HT-29细胞的最佳浓度；流式细胞仪逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR
【机 构】
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皖南医学院弋矶山医院胃肠二科,241001,215006苏州大学附属第一医院普外科,皖南医学院弋矶山医院胃肠二科,皖南医学院弋矶山医院胃肠二科,皖南医学院弋矶山医院胃肠二科
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目的 探讨神经酰胺信号转导通路在胃泌素抑制大肠癌细胞凋亡中的作用及其机制.方法 胃泌素、丙谷胺各设5个浓度梯度,分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 mg/L和8.00、16.00、32.00、64.00、128.00 mg/L.运用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖活力改变,确立5-肽胃泌素和丙谷胺处理HT-29细胞的最佳浓度；流式细胞仪逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测各组细胞凋亡率、神经酰胺、p38磷酸化水平、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA及其蛋白表达变化.结果 胃泌素能促进大肠癌HT-29细胞的增殖,并抑制凋亡,其最佳浓度为25.00 mg/L(F =31.36,P＜0.05)；丙谷胺能明显拮抗胃泌素促进HT-29细胞的增殖作用,其最佳浓度为32.00 mg/L(F =24.31,P＜0.05).胃泌素组细胞凋亡率明显低于对照组和胃泌素+丙谷胺组(q =4.23、4.06,P＜0.05).胃泌素组bax mRNA、蛋白相对表达率以及神经酰胺、p38磷酸化水平明显低于对照组、丙谷胺组及胃泌素+丙谷胺组(q=5.50、6.00、7.50;6.50、7.00、8.50;8.00、8.50、10.00;4.60、4.90、6.53,P＜0.05),而bcl-2 mRNA、蛋白相对表达率与其相反(q =4.95、4.24、7.07;7.07、6.36、7.78,P＜0.05).结论 胃泌素能够通过神经酰胺信号转导通路抑制大肠癌HT-29细胞凋亡,其可能是通过抑制p38活性、上调bcl-2及下调bax表达来实现的,但此信号传导通路能够被胃泌素受体拮抗剂丙谷胺阻断。
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