【摘 要】
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目的应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术结合质谱分析筛选2，3，7，8-四氯二苯二噁英(2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)与维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白质。方法将36只C57BL/6J孕鼠按照随机数表法分为3组，每组12只。分
【机 构】
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400014 重庆医科大学附属儿童医院整形外科，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，重庆市儿科学重点实验室，重庆市（儿童发育重大疾病诊治与预防）国际科技合作基地,400014 重庆医科大学附属儿童医院整
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目的应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术结合质谱分析筛选2，3，7，8-四氯二苯二噁英(2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)与维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白质。
方法将36只C57BL/6J孕鼠按照随机数表法分为3组，每组12只。分别以28 μg/kg TCDD、80 mg/kg维甲酸在C57BL/6J孕鼠第10.5个妊娠日(gestational day 10.5，GD10.5)灌胃，建立胎鼠腭裂模型，对照组给予等量玉米油灌胃，于GD17.5观察胎鼠腭部的解剖学及组织学改变；取TCDD组、维甲酸组与对照组GD17.5胎鼠的腭组织，从中提取总蛋白质，采用iTRAQ技术联合二维液相色谱-串联质谱分析和鉴定实验组与对照组的差异表达蛋白质；用Western Blot对Annexin A1、14-3-3 sigma差异蛋白进行表达验证。实验数据应用SPSS17.0软件进行统计分析，腭裂发生率的比较采用卡方检验，3组目的蛋白相对表达量比较采用单因素方差分析，方差齐性分析采用Levene检验，组间比较采用Turkey HSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。
结果①成功建立了胎鼠腭裂模型，TCDD组与维甲酸组腭裂发生率分别为97.1%(68/70)和98.6%(70/71)，2组比较差异无统计学意义(χ2＝0.00，P>0.05)，腭裂表型在形态学上相似。②共鉴定出2 996个蛋白质，TCDD组、维甲酸组与对照组比较，分别筛选出差异蛋白75个和90个，2个实验组共同表达的差异蛋白有18个。③Western Blot结果显示，Annexin A1蛋白表达水平对照组为0.52±0.11，TCDD组和维甲酸组分别为0.99±0.34和0.98±0.31，分别与对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；14-3-3 sigma蛋白表达水平对照组为0.55±0.15，TCDD组和维甲酸组分别为0.86±0.17和0.93±0.13，分别与对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，与iTRAQ检测结果一致。
结论应用iTRAQ技术能够快速、有效地筛选TCDD与维甲酸致C57BL/6J胎鼠腭裂发生的共同表达的差异蛋白，这些差异蛋白可能与TCDD、维甲酸致胎鼠腭裂发生密切相关。
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