【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-485-3p(microRNA-485-3p,miR-485-3p)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 体外培养宫颈上皮永生化细胞系H8及宫颈癌细胞系SiHa、HeLa和Caski,采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞中miR-485-3p和核受体亚家族成员1,D组,成员2(nuclear receptor subfamily 1,group D,membe
【机 构】
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青海省妇幼保健院病理科,青海西宁 810007
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目的 探讨微小RNA-485-3p(microRNA-485-3p,miR-485-3p)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 体外培养宫颈上皮永生化细胞系H8及宫颈癌细胞系SiHa、HeLa和Caski,采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞中miR-485-3p和核受体亚家族成员1,D组,成员2(nuclear receptor subfamily 1,group D,member 2,NR1D2) mRNA的表达水平;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测NR1D2蛋白表达水平.以SiHa细胞为研究对象,转染miR-485-3p模拟物、NR1D2小干扰RNA或过表达载体,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证了SiHa细胞总miR-485-3p与NR1D2的调控关系.结果 与H8细胞做比较,宫颈癌细胞系SiHa、HeLa和Caski中miR-485-3p的表达水平降低(P＜0.05),NR1D2 mRNA和蛋白的表达水平升高(P＜0.05).过表达miR-485-3p或低表达NR1D2后,SiHa细胞A值、迁移和侵袭数以及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P＜0.05).miR-485-3p在SiHa细胞中靶向负调空NR1D2表达.过表达NR1D2后,SiHa细胞A值、迁移和侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均升高(P＜0.05).过表达NR1D2逆转了过表达miR-485-3p对SiHa细胞A值、迁移和侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达的影响.结论 miR-485-3p在宫颈癌细胞系中呈低表达,过表达miR-485-3p可能通过靶向负调控NR1D2抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭.
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