【摘 要】
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目的 克隆人WWOX基因及构建WWOX基因真核表达载体并研究其表达.方法 取人新鲜正常肝组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增WWOX基因,将该基因定向克隆到真核
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院普外Ⅳ科
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目的 克隆人WWOX基因及构建WWOX基因真核表达载体并研究其表达.方法 取人新鲜正常肝组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增WWOX基因,将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-WWOX,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的WWOX基因通过脂质体介导下转染肝癌细胞SMMC-7721.结果 重组质粒pEGFP-N1-WWOX经HindⅢ和BamHI双酶切后,获得4700bp片断和1234bp插入片断,序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致;荧光显微镜下可见转染的SMMC-7721细胞有绿色荧光蛋白的表达.结论 成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-WWOX,WWOX基因在SMMC-7721细胞内成功表达.
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