【摘 要】
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目的 探讨Ku80在端粒酶阴性肿瘤细胞中与端粒和放射敏感性的关系。方法构建重组表达质粒pshRNA—Ku80，转染U20S细胞，并筛选稳定表达的转化克隆。RT—PCR和Westernblot分别在基因和蛋白水平检测干扰前后Ku80表达量的变化。定时PCR检测干扰前后端粒长度的变化。克隆形成实验分析pshRNA—Ku80干扰对U20S细胞放射敏感性的影响。结果流式细胞仪检测重组质粒稳定转染细胞株的转
【机 构】
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湖北省肿瘤生物学行为重点实验室湖北省肿瘤医学临床研究中心武汉大学中南医院放化疗科,武汉430071,湖北省肿瘤生物学行为重点实验室湖北省肿瘤医学临床研究中心武汉大学中南医院放化疗科,武汉430071,
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目的 探讨Ku80在端粒酶阴性肿瘤细胞中与端粒和放射敏感性的关系。方法构建重组表达质粒pshRNA—Ku80，转染U20S细胞，并筛选稳定表达的转化克隆。RT—PCR和Westernblot分别在基因和蛋白水平检测干扰前后Ku80表达量的变化。定时PCR检测干扰前后端粒长度的变化。克隆形成实验分析pshRNA—Ku80干扰对U20S细胞放射敏感性的影响。结果流式细胞仪检测重组质粒稳定转染细胞株的转染效率为（83．23±7．63）％。PCR结果显示，重组质粒组Ku80基因抑制率为（68．09±1．16）％。Westernblot结果表明，重组质粒组Ku80蛋白抑制率达到（11．03±2．45）％。端粒长度检测结果显示，重组质粒组的端粒长度（1．07±0．07）明显短于空白组（4．42±1．30）（F=38．58，P〈0．05），而空质粒组端粒长度（4．1l±0．84）与空白组无明显变化。克隆形成实验结果显示，重组质粒组细胞株SF。值较空白组降低显著（F=1089．61，P〈0．05），放射增敏比（SER）为1．47。结论运用RNAi技术所建立的Ku80表达抑制的细胞模型，可用于以后的基因功能研究；在U20S中，特异性地沉默Ku80会引起端粒长度的缩短，并增加U20S细胞的放射敏感性，推测pshRNA—Ku80引起端粒缩短很可能是其放射增敏的机制之一。
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