【摘 要】
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目的 探讨非病毒载体电穿孔(electroporation,EP)对大鼠早期骨性关节炎的基因治疗效果.方法 选用8周龄健康级雄性SD大鼠,通过切断右膝前交叉韧带及切除内侧半月板前脚的方法
【基金项目】
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科技部973项目;国家863计划项目;北京市科技专项
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目的 探讨非病毒载体电穿孔(electroporation,EP)对大鼠早期骨性关节炎的基因治疗效果.方法 选用8周龄健康级雄性SD大鼠,通过切断右膝前交叉韧带及切除内侧半月板前脚的方法建立早期骨性关节炎模型.选择白细胞介素-1受体阻滞剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)为目的基因.造模术后1周,对患有早期骨性关节炎的膝关节进行治疗,根据不同治疗方式将实验分为4组:单纯骨性关节炎未治疗组(OA组,n=1S)、骨性关节炎单纯目的基因治疗组(NP组,n=15)、骨性关节炎电穿孔目的基因治疗组(EP组,n=15)和正常对照组(n=15).各组在治疗后1周、2周、3周、4周处死大鼠,抽取右膝关节液20μl用于ELISA检测,分析其中IL-1Ra及白细胞介素-1 β(IL-1 β)蛋白质含量,游离右侧膝关节滑膜及软骨组织用于PCR检测,分析其中IL-1Ra及IL-1 β基因表达情况;在治疗后4周,分离右膝股骨髁进行大体观察及病理学组织检查.结果 大体观察结果显示,OA组与NP组股骨内侧髁负重区关节软骨大面积损伤,EP组软骨表面完整光滑;病理结果显示,OA组及NP组中软骨严重破坏、细胞外基质大量丢失,EP组软骨损伤仅局限在表层;PCR结果显示,EP组IL-1Ra基因的相对表达程度明显高于其他组(P＜0.01),4周时是正常组的4.29倍,IL-1 β基因表达水平在观察周期内与正常组差异无统计学意义(P＞0.05),ELISA检测结果趋势与PCR一致.结论 电穿孔转染IL-1Ra能够抑制大鼠骨性关节炎的发展,为骨性关节炎基因治疗的临床研究提供新手段.
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