【摘 要】
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目的:在乳酸克鲁维酵母中表达人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)与IgG Fc的融合蛋白.方法:首先获得sTNFRⅡ-IgGFc融合基因片段,然后构建至乳酸克鲁维酵母表达载体pKLACl中
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目的:在乳酸克鲁维酵母中表达人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)与IgG Fc的融合蛋白.方法:首先获得sTNFRⅡ-IgGFc融合基因片段,然后构建至乳酸克鲁维酵母表达载体pKLACl中,获得sTNFRⅡ-IgGFc的表达载体,并将其电转化乳酸克鲁维酵母(△ura3).通过ELISA方法筛选高表达sTNFRⅡ-IgGFc融合蛋白的重组乳酸克鲁维酵母菌株,采用还原和非还原SDS-PAGE分析融合蛋白是否形成二聚体结构.Western印迹验证sTNFRⅡ-IgGFc融合蛋白在乳酸克鲁维酵母(△ura3)中的表达.结果:构建了sTNFRⅡ-IgGFc表达载体pKLACl一sTNFRⅡ-IgGFc,获得了表达sTNFRⅡ-IgGFc的乳酸克鲁维酵母菌株,SDS-PAGE和Western印迹表明该融合蛋白能自发形成类似于抗体的二聚体结构.结论:实现了sTNFRⅡ-igGFc融合蛋白在乳酸克鲁维酵母(△ura3)中的表达.
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