【摘 要】
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目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein-Barr virus, EBV)感染的早期诊断，并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联，密码子优化后全基因合成；将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中，在大肠埃希菌中进行表达，并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白；利用Western blot技术对目的蛋白
【机 构】
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102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,100026 北京出入境检验检疫局技术中心,102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,102206 北京，中国疾病预防控制中心
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目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein-Barr virus, EBV)感染的早期诊断，并初步评价其抗原性。
方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联，密码子优化后全基因合成；将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中，在大肠埃希菌中进行表达，并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白；利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定，并建立EBV-IgM抗体检测捕获法ELISA技术，初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。
结果所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2.8 mg/ml，纯度为99.01%；Western blot实验发现，以anti-Trx单克隆抗体或EBV-IgM阳性血清作为第一抗体，在NC膜约26 ×103处都可以发现特异条带(与预期一致)；对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出，阳性血清样本OD值1.352(95%CI：1.233～1.489)与阴性血清样本OD值0.135(95%CI：0.113～0.159)分布区组明显(P<0.05)，其中灵敏度为98.0%，特异性为96.0%，一致性检验kappa值为0.940，一致性优异。
结论原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原，偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中。
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