【摘 要】
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目的:用Western blot印迹杂交法和人类基因芯片研究氯喹(chloroquine,CQ)对辐射抗拒人乳腺癌MDA-MB231细胞辐射增敏的作用机制.方法:用克隆存活分析法建立MDA-MB231细胞在有
【机 构】
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北京大学临床肿瘤学院放疗科,加拿大安大略东北癌症中心肿瘤生物实验室
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目的:用Western blot印迹杂交法和人类基因芯片研究氯喹(chloroquine,CQ)对辐射抗拒人乳腺癌MDA-MB231细胞辐射增敏的作用机制.方法:用克隆存活分析法建立MDA-MB231细胞在有或无CQ时照射对细胞存活曲线;用Western blot印迹杂交法检验与DNA修复有关的5种基因(MLH1,ERCC1,PARP,RAD51,XRCC4)蛋白表达与CQ增加辐射抗拒细胞辐射敏感性的关系;用人类基因芯片筛选与CQ增加辐射抗拒细胞辐射敏感性相关的基因.结果:加用CQ后在正常细胞、辐射敏感细胞、辐射抗拒细胞均较无CQ的对照细胞死亡增加,其辐射增强因子(radiation potentiation factor,RPF)为1.21～1.23.Western blot印迹杂交法发现无论有、无CQ ,ERCC1在照射后的表达均较未照射细胞明显增高;RAD51的表达在照射后增强,但在3 h后有逐渐减弱趋势;MLH1在照射后24 h的表达比其他时间的表达明显降低.ERCC1,MLH1和RAD51的表达在有或无CQ组均无差别,说明它们与CQ的辐射增敏作用无关.XRCC4,PARP的表达在照射前后无明显变化.人类基因芯片检测发现肿瘤坏死因子诱导蛋白3(tumor necrosis factor, alpha-induced protein 3, TNP3)、二氨基乙酰转移酶(diamine acetyltransferase, ATDA)、铁蛋白H(ferritin H, FRIH)、胶原21[collagen alpha2(i), CA21]4个基因可能与CQ增加细胞辐射敏感性有关.结论:CQ增加MDA-MB231细胞的辐射敏感性;CQ不影响MLH1,ERCC1,PARP,RAD51,XRCC4基因在辐射抗拒MDA-MB231细胞的蛋白表达; TNP3可能在CQ使辐射抗拒MDA-MB231细胞辐射敏感性增加的过程中起着重要作用.
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