【摘 要】
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[目的]本研究旨在结合酵母菌蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)与其底物蛋白鸡胱抑素C (chicken cystatin C,cC)在酵母中的共表达,理解PDI影响外源蛋白合成与表达的调控规律.运用转录组深度测序技术(RNA-Seq)筛选差异基因,调取并鉴定影响cC表达的关键基因,为解析外源蛋白高效表达机制,改造工程菌株提供理论支撑.[方法]以巴斯德毕赤酵母GS115、GS 115-cC为出发菌株,采用电转的方法将携带PDI编码基因的载体pPIC3.5K转
【机 构】
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辽宁大学生命科学院,辽宁沈阳 110036
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[目的]本研究旨在结合酵母菌蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)与其底物蛋白鸡胱抑素C (chicken cystatin C,cC)在酵母中的共表达,理解PDI影响外源蛋白合成与表达的调控规律.运用转录组深度测序技术(RNA-Seq)筛选差异基因,调取并鉴定影响cC表达的关键基因,为解析外源蛋白高效表达机制,改造工程菌株提供理论支撑.[方法]以巴斯德毕赤酵母GS115、GS 115-cC为出发菌株,采用电转的方法将携带PDI编码基因的载体pPIC3.5K转入到GS 115/GS 115-cC菌株,使其在菌株中过表达,研究过表达PDI对cC表达的影响.采用RNA-Seq深度测序方法,研究重组毕赤酵母基因表达差异情况.并结合KEGG注释结果对数据进行分析,挑选差异显著表达基因进行验证,初步明确其在蛋白表达调控方面的功能.[结果]本研究通过构建过表达PDI重组毕赤酵母菌株,使得外源蛋白cC的表达量显著增加.利用RNA-seq技术分析过表达PDI菌株与正常菌株的差异,最终筛选了373个差异表达基因,其中有122个差异基因注释到KEGG生物通路,包括12个基因注释到蛋白质转运和分解代谢途径,21个基因注释到蛋白质折叠分选和降解途径,以及24个基因参与蛋白质的翻译途径等.[结论]在毕赤酵母中过表达PDI能显著增加外源蛋白cC的表达量.通过对过表达与正常表达PDI的毕赤酵母基因的表达谱分析,初步确定了其中一些转录情况变化显著的基因,明确了它们参与的细胞途径和信号通路,为改造具有高效率表达淀粉样蛋白的酵母菌株奠定基础.
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