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目的:建立测定蜘蛛香药材中4种缬草素类成分缬草三酯、Chlorovaltrate、Jatamanvaltrate P和Jatamanvaltrate Q含量的HPLC法。方法:采用Eclipse OB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱,0~20min A∶B=75∶25,20~25min A∶B=87∶13,25min后A∶B=75∶25;流速0.8ml/min;检测波长256nm;柱温25℃。结果:缬草三酯、Chlorovaltrate、Jatamanvaltrate P和Jatamanvaltrate Q的线性范围分别为0.18~3.06mg、0.23~3.41mg、0.12~1.72mg、1.22~20.41mg,精密度RSD分别为1.31%、1.41%、2.82%和1.35%(n=7),重现性RSD分别为2.08%、1.43%、1.86%和1.39%(n=4),平均加样回收率分别为(99.72±0.33)%、(97.74±1.05)%、(99.90±0.77)%和(100.03±1.47)%(n=5),稳定性RSD分别为2.78%、1.98%、2.21%和2.62%(n=3)。结论:本方法准确、简便、快速,可用于蜘蛛香药材的质量控制。