RyR2-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对离体心肌细胞RyR2基因表达的影响

来源 :临床医学工程 | 被引量 : 0次 | 上传用户：akgmtgdt

【摘要】

：

目的构建携带RyR2-shRNA的慢病毒载体，并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果。方法设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA，克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载

【作者】

：

王前段萍朱涵穆永慧赵伟达王志举章茜

【机构】

：

郑州大学基础医学院生理学教研室,河南大学生命科学院生物工程系

【出处】

：

临床医学工程

【发表日期】

：

2012年9期

【关键词】

：

慢病毒载体 RyR2 RNA干扰新生小鼠 Lentivims vector RyR2 RNA interference （RNAi） Neonatal

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目的构建携带RyR2-shRNA的慢病毒载体，并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果。方法设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA，克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载体psiHIV—U6-eGFP，构建表达RyR2-shRNA的慢病毒载体，通过将慢病毒转移质粒和包装质粒共转染293T细胞，得到重组慢病毒载体颗粒，然后离体感染小鼠心肌细胞．采用Real—timePCR检测RyR2在mRNA水平的沉默效应。结果经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功并成功包装。流式细胞仪测得重组慢病毒感

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