南瓜SCoT-PCR反应体系的优化与引物筛选

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为了构建适合南瓜scoT—PCR反应的最佳体系,笔者对需要控制的5个变量使用L2s(5‘)正交试验设计。结果表明,最佳优化体系为:2.5mmol·L-1 Mg2+、0.40mmol·L-1 dNTPs、0.5UTaq酶、1.00μmol·L-1 引物、30ng模板DNA,共20μL。然后从51个SCoT引物中筛选出多态性明显的引物20个,并优化最适退火温度。最后,对所得优化体系进行可行性验证。该体系有利于scoT标记在南瓜材料上的应用,构建的优化体系及筛选出的引物可为南瓜分子
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