转化生长因子β1对膀胱癌细胞增殖与迁移能力的影响及其机制

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目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响及其机制。方法以浓度为0、1、5、10、20、40μg/L的TGF-β1处理T24细胞24 h,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用细胞划痕方法检测其迁移能力,采用Western blot检测细胞中程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白的相对表达量;使用浓度为5μg/L的TGF-β1处理T24细胞0、0.5、1、2、6、24 h,采用Western blot实验检测细胞PD-L1蛋白及磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)蛋白的相对表达量;将T24细胞分为A~C组,A组使用正常培养基培养,B组培养基中加入终浓度为5μg/L的TGF-β1培养,C组培养基加入终浓度为5μg/L的TGF-β1及SB431542培养,Western blot方法检测A~C组细胞中PD-L1相对表达量;将T24细胞分为D~G组,D组使用正常培养基培养,E组培养基中加入终浓度为5μg/L的TGF-β1培养,F组培养基中加入终浓度为5μg/L的TGF-β1、AKT抑制剂MK2206培养,G组培养基加入终浓度5μg/L的TGF-β1、ERK抑制剂U0126处理T24细胞,均处理24 h, Western blot方法检测D~G组细胞中p-AKT、p-ERK和PD-L1相对表达量。结果 浓度0、1、5、10、20、40μg/L的TGF-β1处理T24细胞24 h,其他浓度的TGF-β1处理T24细胞的增殖能力相较于0μg/L时均显著增强(t=3.59~12.18,P<0.05),各浓度之间T24细胞的迁移率没有显著差异(P>0.05),浓度为5μg/L时相较于其他浓度,PD-L1蛋白表达明显升高(t=3.22~5.64,P<0.05);浓度为5μg/L的TGF-β1处理T24细胞0、0.5、1、2、6、24 h后,T24细胞PD-L1蛋白表达随时间延长逐渐升高(F=199.20,P<0.05),并且处理时间为0.5 h相较于其他处理时间,p-AKT、p-ERK表达量显著升高(t=6.26~64.24,P<0.05);B组与A组比较,T24细胞PD-L1蛋白表达水平明显升高(t=31.24,P<0.05),C组与B组比较,PD-L1蛋白的表达水平降低(t=17.04,P<0.05);E组与D组比较,T24细胞的PD-L1、p-AKT、p-ERK蛋白水平明显升高(t=9.44~37.29,P<0.05),G组与E组比较,p-AKT、PD-L1蛋白表达水平显著降低(t=104.40、6.74,P<0.05);F组与E组比较,p-ERK、PD-L1蛋白表达水平显著降低(t=24.26、17.01,P<0.05)。结论 TGF-β1可以促进膀胱癌T24细胞增殖和细胞内PD-L1表达,不影响其迁移,其作用机制可能是通过促进细胞内PD-L1、p-ERK和p-AKT表达实现的。
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