【摘 要】
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目的 探索脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)的Hedgehog信号通路在肝纤维化炎症微环境中的活化情况.方法 ADMSCs原代提取及培养,流式鉴定Sca
【机 构】
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成都医学院 成都610500成都医学院第一附属医院科研实验中心 成都610500;成都医学院 成都610500;成都医学院第一附属医院烧伤整形科 成都610500;成都医学院第一附属医院科研实验中心
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目的 探索脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)的Hedgehog信号通路在肝纤维化炎症微环境中的活化情况.方法 ADMSCs原代提取及培养,流式鉴定Sca-1、CD44、CD34、CD45.利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)和转化生长因子-[β1 (TGF-β1)的协同作用方式构建模拟肝纤维化炎症微环境,将ADMSCs分为对照组(PBS组)、试验组(TNF-α+IFN-γ+TGF-β1协同刺激组).将12只雄性C57BL/6小鼠随机分为两组,对照组(橄榄油,n=6)和试验组(四氯化碳,CG,n=6),ADMSCs转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒,用于细胞的体内示踪,稳转细胞通过小鼠尾静脉注射,3d后安乐死,取脾脏及肝脏,制作组织冰冻切片.通过qRT-PCR、Westernblot、免疫荧光方法检测Hedgehog通路中Smo和Gli1的表达情况.结果 实验组的Smo和Gli1 mRNA和蛋白表达量高于对照组(P＜0.05);肝纤维化小鼠肝脏中ADMSCs数量多于对照小鼠(P＜0.05),而两组小鼠的脾脏中ADMSCs数量差异无统计学意义(P＞0.05).组织免疫荧光实验发现,肝纤维化小鼠肝脏中的ADMSCs的Smo和Gli1蛋白表达高于对照小鼠.结论 肝纤维化炎症微环境能够促进ADMSCs的Gli1、Smo分子表达,激活Hedgehog信号通路.
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