RNA干扰技术抑制内源性绿色荧光蛋白的表达

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：Lucy

【摘要】

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目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞株;构建短发夹RNA(shRNA)表达质粒并观察其对内源性GFP的抑制作用.方法转染pEGFP-N1至HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定表达GFP的细

【作者】

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陈维贤黄爱龙闫歌唐霓张娟陈娟

【机构】

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重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室

【出处】

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生物技术通报

【发表日期】

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2005年6期

【关键词】

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RNA干扰绿色荧光蛋白短发夹状RNA RNA interferencing Green fluorescent protein Short hairpin

【基金项目】

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中国科学院资助项目

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目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞株;构建短发夹RNA(shRNA)表达质粒并观察其对内源性GFP的抑制作用.方法转染pEGFP-N1至HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定表达GFP的细胞株(HepG2.GFP);设计合成针对GFP基因的siRNA对应的DNA片段,插入转录载体pTZU6+1,构建shRNA表达载体pSHGFP,转染HepG2.GFP,荧光显微镜观察细胞荧光强度,以western blot检测GFP蛋白水平,以RT-PCR检测mRNA水平.结果利用PCR方法从HepG2.GF

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