【摘 要】
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目的 利用巴斯德毕赤酵母制备重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并评价其免疫原性.方法 将EV71的P1和3CD基因插入巴斯德毕赤酵母基因组中,构建EV71 VLPs表达质粒,转化巴斯德毕赤酵母KM71感受态细胞,Western blot法筛选高表达克隆,5L发酵罐发酵,阳离子交换层析和凝胶体积排阻层析纯化EV71 VLPs.用不同剂量(0.05、0.5、5μg)的纯化EV71 VLPs免疫小鼠,ELISA法检测小
【机 构】
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上海至成生物科技有限公司,上海200051;上海生物制品研究所有限责任公司,上海200051;上海至成生物科技有限公司,上海200051;上海生物制品研究所有限责任公司,上海200051
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目的 利用巴斯德毕赤酵母制备重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并评价其免疫原性.方法 将EV71的P1和3CD基因插入巴斯德毕赤酵母基因组中,构建EV71 VLPs表达质粒,转化巴斯德毕赤酵母KM71感受态细胞,Western blot法筛选高表达克隆,5L发酵罐发酵,阳离子交换层析和凝胶体积排阻层析纯化EV71 VLPs.用不同剂量(0.05、0.5、5μg)的纯化EV71 VLPs免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体滴度.结果 EV71 VLPs表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确.纯化的EV71 VLPs在电镜下可见大小均一、直径约为30 nm的典型VLPs;动态光散射分析显示,EV71 VLPs的流体力学直径为35.82 nm;经0.05、0.5和5 μg EV71 VLPs免疫后,小鼠血清ELISA抗体的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为119、800和3200,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EV71 VLPs在巴斯德毕赤酵母中成功表达,且具有良好的免疫原性.
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