目的 研究RNA干扰技术(RNAi)沉默Hedgehog(Hh)信号转导途径中核心转录因子Gli1基因表达后对U251细胞增殖与凋亡以及下游因子Bcl-2、Bax、cycin D1表达的影响。 方法 合成、转染4对针对Gli1 mRNA不同位点序列的siRNA (58、59、60、61)至人胶质瘤U251细胞，RT-PCR检测细胞Gli1 mRNA的表达，筛选最有效抑制Gli1 mRNA表达的siRNA干扰片段(siRNA-Gli1)；RT-PCR、Western blotting分别检测转染SiRNA-Gli后不同时间U251细胞Gli1mRNA和蛋白的表达，确定转染干扰的时间规律；实验分为3组：siRNA-Gli1组（转染筛选后siRNA-Gli1片断）、siRNA-NC组（转染阴性对照siRNA片断）、siRNA-N组（空白对照）。RT-PCR、Western blotting分别检测各组转染48 h后U251细胞cyclin D1、Bcl-2及Bax mRN和蛋白的表达，MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。 结果 干扰片断58、59、60、61、NC的转染效率均达69.2％；RT-PCR检测显示转染后48 h U251-60细胞无明显Gli1 mRNA表达，选择60作为最佳干扰片段siRNA-Gli1转染U251细胞,48h时无明显Gli1 mRNA和蛋白表达，确定48 h为转染干扰的最佳时间；转染48 h后与siRNA-N和siRNA-NC组相比,siRNA-Gli1组U251细胞Bcl-2、cyclin D1 mRNA和蛋白表达下调、Bax mRNA和蛋白上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。MTT检测显示24、48和72 h时siRNA-Gli1组细胞增殖抑制率均明显高于siRNA-NC和siRNA-N组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞术结果显示siRNA-Gli1组细胞凋亡率高于siRNA-NC和siRNA-N组，差异有统计学意义(P＜0.05)，且siRNA-Gli1组G1/G0期细胞比例增加,S期细胞明显减少。 结论 针对Gli1基因设计合成的siRNA-Gli1能明显抑制人胶质瘤U251细胞生长并能诱导其凋亡，其机制可能与下调cyclin D1、Bcl-2的表达，上调Bax的表达有关。
RNAi沉默Gli1基因对人胶质瘤细胞U251增殖与凋亡的影响
【摘 要】
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目的 研究RNA干扰技术(RNAi)沉默Hedgehog(Hh)信号转导途径中核心转录因子Gli1基因表达后对U251细胞增殖与凋亡以及下游因子Bcl-2、Bax、cycin D1表达的影响。 方法 合成、转染4对针对Gli1 mRNA不同位点序列的siRNA (58、59、60、61)至人胶质瘤U251细胞，RT-PCR检测细胞Gli1 mRNA的表达，筛选最有效抑制Gli1 mRNA表达的si
【机 构】
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830011乌鲁木齐，新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科,830011乌鲁木齐，新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科,830011乌鲁木齐，新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科,830011乌鲁木齐，新疆医科大
【出 处】
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中华神经医学杂志
【发表日期】
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2011年10期
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