研究大鼠坐骨神经电损伤后脊髓背根神经节(DRG)中大电导钙激活钾(BKCa)通道表达变化及其对感觉传导功能的影响。
方法取成年SD大鼠136只,按照随机数字表法分为正常对照组8只,假电伤组及75、100、125 V电伤组各32只。正常对照组大鼠不做处理,假电伤组大鼠仅行左侧坐骨神经主干钝性分离,75、100、125 V电伤组大鼠左侧坐骨神经主干造成相应电压电损伤。正常对照组大鼠于饲养1周时,假电伤组及各电伤组大鼠于伤后3 d及1、2、3周,每组各取8只测定大鼠机械缩足反射阈值(PWMT),其中100 V电伤组大鼠伤后1周行前述检测后于鞘内注射NS1619,注射后3 h内每隔30分钟测定1次PWMT。各组各时相点大鼠完成PWMT检测后处死,取脊髓L4~L6段DRG,采用免疫组织化学染色法观察BKCa通道分布,蛋白质印迹法、RT-PCR法分别检测BKCa通道蛋白、mRNA表达。对数据行单因素方差分析、析因设计方差分析、SNK检验。
结果(1)与正常对照组的(11.2±2.0)g和假电伤组的(11.3±2.1)、(12.0±2.0)、(11.1±1.6)、(10.3±2.1)g比较,75、100 V电伤组大鼠伤后3 d及1、2、3周PWMT显著降低[(5.8±0.6)、(5.0±0.8)、(4.2±0.3)、(5.9±1.1)g,(5.3±1.3)、(5.9±2.0)、(4.5±2.7)、(4.3±1.3)g,P值均小于0.05]。125 V电伤组大鼠伤后3 d、1周PWMT[(6.1±1.6)、(5.7±1.7)g]较正常对照组和假电伤组显著降低,伤后2、3周PWMT[(26.7±3.3)、(21.7±3.4)g]明显高于其余4组,P值均小于0.05。100 V电伤组大鼠伤后1周注射后3 h内PWMT呈先增高后降低趋势,其中注射后30、60、90、120 min时PWMT为(8.5±0.8)、(9.7±1.2)、(11.0±1.5)、(8.6±0.8)g,较干预前明显增高(P值均小于0.05)。(2)正常对照组及各时相点假电伤组大鼠DRG神经元细胞质、细胞膜BKCa通道阳性表达均较多;各电伤组大鼠DRG神经元细胞质、细胞膜BKCa通道阳性表达随伤后时间延长而减少,以125 V电伤组最为明显。(3)伤后3 d,各组大鼠DRG中BKCa通道蛋白水平相近(P值均大于0.05)。与正常对照组的0.477±0.027、0.521±0.034、0.475±0.022和假电伤组的0.511±0.025、0.489±0.025、0.483±0.032比较,75、100、125 V电伤组大鼠伤后1、2、3周DRG中BKCa通道蛋白水平明显下调(0.274±0.026、0.202±0.019、0.285±0.033,0.253±0.022、0.233±0.024、0.203±0.017,0.092±0.017、0.095±0.021、0.087±0.016,P值均小于0.05)。125 V电伤组大鼠伤后1、2、3周DRG中BKCa通道蛋白水平较75、100 V电伤组明显降低(P值均小于0.05)。(4)与正常对照组的0.581±0.051和假电伤组的0.603±0.045、0.586±0.032、0.614±0.045、0.572±0.038比较,75、100、125 V电伤组大鼠伤后3 d及1、2、3周BKCa通道mRNA水平显著下调(0.326±0.021、0.238±0.019、0.291±0.022、0.364±0.018,0.264±0.020、0.293±0.017、0.243±0.023、0.295±0.021,0.134±0.023、0.089±0.017、0.074±0.018、0.087±0.020,P值均小于0.05)。125 V电伤组大鼠各时相点BKCa通道mRNA水平较75、100 V电伤组明显降低(P值均小于0.05)。
结论大鼠坐骨神经电损伤后,对应脊髓节段DRG中BKCa通道表达降低,其参与神经电损伤后触痛觉过敏的病理过程。