CYP3A29稳定表达HepG2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定

来源 :中国人兽共患病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：charset

【摘要】

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目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因，并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29；以

【作者】

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薛正楷魏泓商海涛叶彬

【机构】

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重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,第三军医大学实验动物学教研室

【出处】

：

中国人兽共患病学报

【发表日期】

：

2009年7期

【关键词】

：

巴马小型猪 CYP3A29同工酶 HEPG2 逆转录酶PCR WESTERN-BLOT 硝苯地平 Bama miniature pig CYP3A29 iso

【基金项目】

：

国家“十五”科技攻关计划重点项目资助课题（2004BA717B23）

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目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因，并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29；以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板，采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签，扩增产物经BamHI/XhoI双酶切，将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1（＋）中，并测序验证；将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞，G418筛选

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