【摘 要】
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采用同源重组法制备钾离子转运蛋白基因TRK1和TRK2缺失的酿酒酵母钾营养缺陷型.通过RNA反转录PCR方法从拟南芥幼根扩增获得片段长度为2 139bp的AtKup1基因,以此片段为膜板,采
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采用同源重组法制备钾离子转运蛋白基因TRK1和TRK2缺失的酿酒酵母钾营养缺陷型.通过RNA反转录PCR方法从拟南芥幼根扩增获得片段长度为2 139bp的AtKup1基因,以此片段为膜板,采用DNA重排技术,经DNase I降解,Primerless PCR和Primer PCR建立AtKup1基因突变库.将突变库和未经DNA重排处理的AtKup1基因分别构建酵母穿梭载体,并导入K+转运蛋白基因TRK1和TRK2缺失的酿酒酵母中,分别在低钾(5.0mmol/L KCl)不含色氨酸的培养基上筛选转化子,从突变基因库酵母转化子中获得2株长势明显优于AtKup1基因转化子的突变基因转化菌株,菌株质粒上的突变AtKup1基因核苷酸测序结果表明突变基因AtKup1发生了2个碱基的置换,造成了2个氨基酸的改变.转化烟草烟叶化学成分分析证实突变基因的吸钾活性显著提高.
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