新城疫病毒的实验室诊断一般是接种SPF鸡胚分离病原，通过血凝抑制性实验（HI）或者快速实时逆转录聚合酶链反应试验（RRT-PCR）来进行确诊。众所周知，新城疫病毒可在鸡胚的尿囊腔内复制繁殖，而鸡胚平均致死时间（MDT）取决于病毒毒力的强弱。血凝抑制试验（HI）常被用来判断一种未知病毒是否属于新城疫病毒，单克隆抗体试验可进一步对新城疫病毒进行分型。当没有唯一的单克隆抗体来确定新城疫病毒的毒性时，可用一组单克隆抗体来区分病毒的差异，例如，可以从PPMV-1中区分出低毒力的新城疫病毒。此外，单克隆抗体试验对于快速鉴定Ⅰ型新城疫病毒的效果并不佳，绝大多数单克隆抗体已经过改良并适用于识别Ⅱ型新城疫病毒，但并不能识别Ⅰ型新城疫病毒。由于单克隆抗体直接作用于单一特异的抗原表位，因此它们检测不同病毒的能力往往是有限的。而其他血清学的方法，如ELISA也常用于实验室诊断，以用来评估疫苗接种后的抗体反应。不过，这对于疾病的监测和诊断方面的价值非常有限，主要因为家禽使用疫苗的情况非常普遍。