【摘 要】
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目的 探讨Daxx对Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞凋亡的影响以及可能的机制.方法 体外培养大鼠源性血管平滑肌细胞,然后分别将人源性pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1(+)-Daxx质粒瞬时转染进入血管平滑肌细胞中,并通过RT-PCR和Western blot两种方法检测平滑肌细胞内Daxx的表达；瞬时转染成功的血管平滑肌细胞用10 mg/L Chol：MβCD孵育48 h,建立泡沫细胞模
【机 构】
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湖南中医药大学药学院药理教研室,湖南省长沙市410208;南华大学药物药理研究所,湖南省衡阳市421001
【出 处】
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第十二次全国动脉硬化性疾病学术会议
论文部分内容阅读
目的 探讨Daxx对Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞凋亡的影响以及可能的机制.方法 体外培养大鼠源性血管平滑肌细胞,然后分别将人源性pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1(+)-Daxx质粒瞬时转染进入血管平滑肌细胞中,并通过RT-PCR和Western blot两种方法检测平滑肌细胞内Daxx的表达；瞬时转染成功的血管平滑肌细胞用10 mg/L Chol：MβCD孵育48 h,建立泡沫细胞模型,然后用油红O染色检测细胞内脂滴情况.再分别采用CCK-8法检测血管平滑肌细胞的细胞活性,流式细胞术检测血管平滑肌细胞的凋亡情况.Western blot检测ASK1、P-JNK的表达情况.为了进一步明确JNK通路在Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞凋亡中发挥的作用,我们采用JNK特异性抑制剂SP600125对Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞进行干预.结果 转染后细胞经RT-PCR和Western blot检测细胞内Daxx表达明显增加.用Chol：MβCD孵育后,细胞活性下调,凋亡率增加,细胞内ASK1、P-JNK的表达明显增加；Daxx过表达的血管平滑肌细胞中ASK1和JNK的表达上调最显著,尤其是JNK磷酸化水平升高；经SP600125处理后,用Chol： MβCD诱导的pcDNA3.1(+)-Daxx组细胞活性明显增高,同时磷酸化JNK蛋白的表达水平明显减弱.结论 Daxx能够加强Chol：MβCD诱导的血管平滑肌细胞凋亡,可能与上调ASK1、JNK的表达并促进JNK磷酸化有关.
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