【摘 要】
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目的:探讨miR-155对高糖作用下视网膜血管内皮细胞(HRECs)氧化应激的调控作用及作用机制.方法:体外培养HRECs,使用不同浓度D-葡萄糖作用于HRECs 48 h或72 h,CCK-8法检测细胞存活率.将HRECs分为正常组(5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高渗组(50 mmol·L-1甘露醇培养)、高糖组(30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高糖+miR-NC组(转染miRNA scramble+30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高糖+miR-155-i组(转染miR
【机 构】
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琼海市人民医院 眼科,海南 琼海 571400
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目的:探讨miR-155对高糖作用下视网膜血管内皮细胞(HRECs)氧化应激的调控作用及作用机制.方法:体外培养HRECs,使用不同浓度D-葡萄糖作用于HRECs 48 h或72 h,CCK-8法检测细胞存活率.将HRECs分为正常组(5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高渗组(50 mmol·L-1甘露醇培养)、高糖组(30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高糖+miR-NC组(转染miRNA scramble+30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高糖+miR-155-i组(转染miR-155 inhibitor+30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高糖+miR-155-i+siNC组(转染miR-155 inhibitor和siRNA空质粒+30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养)、高糖+miR-155-i+siNrf2组(转染miR-155 inhibi-tor和Nrf2 siRNA+30 mmol·L-1 D-葡萄糖培养).RT-qPCR法检测miR-155和Nrf2 mRNA相对表达量.流式细胞术分别用于检测细胞凋亡和细胞内活性氧簇(ROS)水平.ELISA检测各组细胞培养上清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.Western blotting法检测胞质和胞核Nrf2蛋白及细胞总蛋白中HO-1蛋白表达.双荧光素酶报告基因用于验证miR-155和Nrf2 mRNA之间的靶向关系.结果:与D-葡萄糖0 mmol·L-1组相比,30 mmol·L-1 D-葡萄糖作用48 h时HRECs中miR-155相对表达量显著上调(P<0.05),且细胞存活率<70％,可用于后续实验.与正常组相比,高糖组细胞凋亡率增加,细胞培养上清中SOD、GSH-Px含量降低,同时MDA和ROS含量(平均荧光强度,MFI)升高,Nrf2和HO-1蛋白表达下调(均P<0.05);而与高糖组相比,高糖+miR-155-i组细胞凋亡率降低,细胞培养上清中SOD、GSH-Px含量升高,同时MDA和ROS含量降低,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(均P<0.05);与高糖+miR-155-i组相比,高糖+miR-155-i+siNrf2组上述指标则被逆转.经双荧光素酶报告基因分析,miR-155 mimics和Nrf2-3′UTR-WT共转染可降低荧光素酶活性(P<0.05).结论:高糖可诱导HRECs miR-155表达上调,敲低miR-155表达后能够保护高糖作用下HRECs凋亡和氧化应激损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1通路有关.
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