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关键词 膀胱移行细胞癌 癌旁组织 MMP2 CA50
膀胱移行细胞癌是泌尿系常见的肿瘤，术后易复发，肿瘤在侵袭和转移过程中基质金属蛋白酶类（MMP2）和糖链抗原CA50起重要作用，采用免疫组化法，联合检测MMP2和CA50在各组织中的表达，据其不同的阳性表达程度，分析其与肿瘤分期、分级的关系及意义。
资料与方法
一般资料：选取2007年1月～2009年11月收治膀胱癌组患者45例，男35例，女10例；年龄29～81岁，平均55.7岁。行膀胱切除或部分切除术。经膀胱镜检+活检诊断为膀胱移行细胞癌，术后病理证实膀胱移行细胞癌Ⅰ级14例，移行细胞癌Ⅱ级17例，移行细胞癌Ⅲ级14例。本组11例膀胱全切，34例术后1周开始行膀胱灌注化疗，方案：NS 20ml+羟喜树碱20mg，1次/周×8，后1次/月×10，每3个月复查膀胱镜，6例复发再次手术，其中1例术后死于脑血管病，病人全部得以随访。另于前列腺开放手术中切取正常膀胱组织10块，约0.5cm×0.5cm×0.5cm大小作为对照。
方法：①取材固定包埋：膀胱移行细胞癌术后即取材，取癌组织、癌旁1.0cm、2.0cm膀胱组织各1块；另于前列腺开放手术中切取正常膀胱组织10块，大小均为0.5cm×0.5cm×0.5cm。②采用MMP2、CA50免疫组化染色试剂，一抗为鼠抗人MMP2、CA50单克隆抗体，生物素标记的通用性型二抗工作液，用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
评分标准：采用半定量积分法，以胞浆或胞膜中出现棕黄色或黄色为阳性细胞，据阳性细胞比例及着色深浅计数。计数5个随机高倍镜视野下100个细胞中阳性细胞数，以百分数表示，取其平均值。
统计学处理：采用SPSS10.0统计软件，用秩和检验和Spearman等级相关分析处理数据（检验水准α＝0.01）。
结 果
本组45例膀胱移行细胞癌组织细胞中，MMP2有7例阴性表达（15.56%），11例弱阳性表达（24.44%），19例阳性表达（42.22%），8例强阳性表达（17.78%）。CA50有15例阴性表达（33.33%），9例弱阳性表达（20.00%），14例阳性表达（31.11%），7例强阳性表达（15.56%）。二者在各膀胱组织细胞中的表达阳性率：正常膀胱组织＜癌旁2.0cm组织＜癌旁1.0cm组织＜膀胱癌组织。本组中MMP2和CA50表达具有一致性，从移行细胞癌Ⅰ～Ⅲ级，阳性率逐渐升高。瘤细胞表达强度不均，肿瘤间质阳性强度不均匀，与肿瘤细胞邻接处表达较强，3组之间差异显著（P＜0.01）。MMP2阳性表达与肿瘤的病理分级、浸润深度呈正相关性。10例膀胱正常黏膜MMP2均为阴性，细胞浆内无深棕色颗粒。见表1、2。
讨 论
肿瘤细胞的侵袭和转移是恶性肿瘤致死的主要原因，研究发现基底膜（BM）及细胞外基质（ECM）在肿瘤的浸润和转移过程中起关键作用。肿瘤细胞在侵袭和转移中破坏ECM，而基质金属蛋白酶类（MMPs）是破坏细胞外基质的主要酶类，当细胞恶变时常有MMPs的升高。Dvaies等用酶普分析法定量检测膀胱癌组织中MMP2的水平，发现有活性的MMP2水平随膀胱癌的恶性分级增加而升高，且侵袭性肿瘤明显高于浅表性肿瘤，MMP2高表达与患者预后明显相关。免疫组化和原位杂交研究证实，肿瘤细胞与间质细胞中均可表达MMP2，但以肿瘤组织表达相对较高。本研究显示，膀胱移行细胞癌组织具有较强分泌MMP2的能力。癌旁不典型增生组织的MMP2蛋白表达较低，但高于正常组织。肿瘤中的血管增生提示预后不良。
糖链抗原CA50为单涎酸 N-节玳酯的抗原，由癌细胞株产生。CA50以酯或脂蛋白结合的形式存在于细胞膜，属于鞘糖脂类标记物，是上皮源性肿瘤的广谱标志物，不具有器官特异性。细胞癌变时，因静止的一些转化酶被激活，引起细胞表面糖类结构发生改变，抗原性质改变，导致肿瘤标志物的产生。糖链抗原CA50在癌变过程中由肿瘤组织和癌细胞产生。
本组通过MMP2和CA50联合检测发现，二者在膀胱移行细胞癌、癌旁组织和正常膀胱组织中的表达具有一致性：膀胱移行细胞癌Ⅰ级阳性表达低于Ⅱ～Ⅲ级，随病理分级的增加表达增强，与肿瘤恶性度呈显著相关性。二者阳性表达与病人的年龄、性别无明显关系与病理分期、分级关系密切。移行细胞癌Ⅰ级阳性表达，大部分基底膜强阳性，表达较均匀，Ⅱ级阳性表达但基底膜阳性表达不均匀，膀胱移行细胞癌Ⅲ级阳性表达，肿瘤、间质细胞阳性表达强度不均，与肿瘤细胞邻接处表达较强，三组之间差异显著（P＜0.01）。各膀胱组织中的表达阳性率：正常膀胱组织＜癌旁2.0cm＜癌旁1.0cm＜膀胱癌组织。阳性表达位于癌细胞胞浆，细胞间质和部分肿瘤组织间质内，阳性表达主要分布在间质、血管临界面及癌侵入膀胱深层组织前缘，特别是呈浸润性生长的癌组织周围表达较强。在10例正常膀胱组织中二者呈阴性表达，与实验组45例中MMP2和CA50的表达有明显的差异，提示与肿瘤的进展有关。本组复发6例患者中，病理分级Ⅲ级者3例，Ⅱ级2例，Ⅰ级1例；其中癌旁2cm切缘MMP2和CA50均阳性者1例，癌旁1cm 2项指标均阳性者3例，癌组织中二者强阳性3例，阳性2例。表明MMP2和CA50的高表达，提示复发率高，预后较差，与患者预后明显相关。故采用MMP2和CA50联合检测分析，对膀胱移行细胞癌患者预后的判断和进一步治疗具有指导意义。
表1 MMP2在各膀胱组织细胞中的表达（例）
表2 CA50 在各膀胱组织细胞中的表达（例）
膀胱移行细胞癌是泌尿系常见的肿瘤，术后易复发，肿瘤在侵袭和转移过程中基质金属蛋白酶类（MMP2）和糖链抗原CA50起重要作用，采用免疫组化法，联合检测MMP2和CA50在各组织中的表达，据其不同的阳性表达程度，分析其与肿瘤分期、分级的关系及意义。
资料与方法
一般资料：选取2007年1月～2009年11月收治膀胱癌组患者45例，男35例，女10例；年龄29～81岁，平均55.7岁。行膀胱切除或部分切除术。经膀胱镜检+活检诊断为膀胱移行细胞癌，术后病理证实膀胱移行细胞癌Ⅰ级14例，移行细胞癌Ⅱ级17例，移行细胞癌Ⅲ级14例。本组11例膀胱全切，34例术后1周开始行膀胱灌注化疗，方案：NS 20ml+羟喜树碱20mg，1次/周×8，后1次/月×10，每3个月复查膀胱镜，6例复发再次手术，其中1例术后死于脑血管病，病人全部得以随访。另于前列腺开放手术中切取正常膀胱组织10块，约0.5cm×0.5cm×0.5cm大小作为对照。
方法：①取材固定包埋：膀胱移行细胞癌术后即取材，取癌组织、癌旁1.0cm、2.0cm膀胱组织各1块；另于前列腺开放手术中切取正常膀胱组织10块，大小均为0.5cm×0.5cm×0.5cm。②采用MMP2、CA50免疫组化染色试剂，一抗为鼠抗人MMP2、CA50单克隆抗体，生物素标记的通用性型二抗工作液，用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
评分标准：采用半定量积分法，以胞浆或胞膜中出现棕黄色或黄色为阳性细胞，据阳性细胞比例及着色深浅计数。计数5个随机高倍镜视野下100个细胞中阳性细胞数，以百分数表示，取其平均值。
统计学处理：采用SPSS10.0统计软件，用秩和检验和Spearman等级相关分析处理数据（检验水准α＝0.01）。
结 果
本组45例膀胱移行细胞癌组织细胞中，MMP2有7例阴性表达（15.56%），11例弱阳性表达（24.44%），19例阳性表达（42.22%），8例强阳性表达（17.78%）。CA50有15例阴性表达（33.33%），9例弱阳性表达（20.00%），14例阳性表达（31.11%），7例强阳性表达（15.56%）。二者在各膀胱组织细胞中的表达阳性率：正常膀胱组织＜癌旁2.0cm组织＜癌旁1.0cm组织＜膀胱癌组织。本组中MMP2和CA50表达具有一致性，从移行细胞癌Ⅰ～Ⅲ级，阳性率逐渐升高。瘤细胞表达强度不均，肿瘤间质阳性强度不均匀，与肿瘤细胞邻接处表达较强，3组之间差异显著（P＜0.01）。MMP2阳性表达与肿瘤的病理分级、浸润深度呈正相关性。10例膀胱正常黏膜MMP2均为阴性，细胞浆内无深棕色颗粒。见表1、2。
讨 论
肿瘤细胞的侵袭和转移是恶性肿瘤致死的主要原因，研究发现基底膜（BM）及细胞外基质（ECM）在肿瘤的浸润和转移过程中起关键作用。肿瘤细胞在侵袭和转移中破坏ECM，而基质金属蛋白酶类（MMPs）是破坏细胞外基质的主要酶类，当细胞恶变时常有MMPs的升高。Dvaies等用酶普分析法定量检测膀胱癌组织中MMP2的水平，发现有活性的MMP2水平随膀胱癌的恶性分级增加而升高，且侵袭性肿瘤明显高于浅表性肿瘤，MMP2高表达与患者预后明显相关。免疫组化和原位杂交研究证实，肿瘤细胞与间质细胞中均可表达MMP2，但以肿瘤组织表达相对较高。本研究显示，膀胱移行细胞癌组织具有较强分泌MMP2的能力。癌旁不典型增生组织的MMP2蛋白表达较低，但高于正常组织。肿瘤中的血管增生提示预后不良。
糖链抗原CA50为单涎酸 N-节玳酯的抗原，由癌细胞株产生。CA50以酯或脂蛋白结合的形式存在于细胞膜，属于鞘糖脂类标记物，是上皮源性肿瘤的广谱标志物，不具有器官特异性。细胞癌变时，因静止的一些转化酶被激活，引起细胞表面糖类结构发生改变，抗原性质改变，导致肿瘤标志物的产生。糖链抗原CA50在癌变过程中由肿瘤组织和癌细胞产生。
本组通过MMP2和CA50联合检测发现，二者在膀胱移行细胞癌、癌旁组织和正常膀胱组织中的表达具有一致性：膀胱移行细胞癌Ⅰ级阳性表达低于Ⅱ～Ⅲ级，随病理分级的增加表达增强，与肿瘤恶性度呈显著相关性。二者阳性表达与病人的年龄、性别无明显关系与病理分期、分级关系密切。移行细胞癌Ⅰ级阳性表达，大部分基底膜强阳性，表达较均匀，Ⅱ级阳性表达但基底膜阳性表达不均匀，膀胱移行细胞癌Ⅲ级阳性表达，肿瘤、间质细胞阳性表达强度不均，与肿瘤细胞邻接处表达较强，三组之间差异显著（P＜0.01）。各膀胱组织中的表达阳性率：正常膀胱组织＜癌旁2.0cm＜癌旁1.0cm＜膀胱癌组织。阳性表达位于癌细胞胞浆，细胞间质和部分肿瘤组织间质内，阳性表达主要分布在间质、血管临界面及癌侵入膀胱深层组织前缘，特别是呈浸润性生长的癌组织周围表达较强。在10例正常膀胱组织中二者呈阴性表达，与实验组45例中MMP2和CA50的表达有明显的差异，提示与肿瘤的进展有关。本组复发6例患者中，病理分级Ⅲ级者3例，Ⅱ级2例，Ⅰ级1例；其中癌旁2cm切缘MMP2和CA50均阳性者1例，癌旁1cm 2项指标均阳性者3例，癌组织中二者强阳性3例，阳性2例。表明MMP2和CA50的高表达，提示复发率高，预后较差，与患者预后明显相关。故采用MMP2和CA50联合检测分析，对膀胱移行细胞癌患者预后的判断和进一步治疗具有指导意义。
表1 MMP2在各膀胱组织细胞中的表达（例）
表2 CA50 在各膀胱组织细胞中的表达（例）