建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者痰中增殖诱导配体(APRIL)mRNA含量的方法,探讨痰脱落细胞APRIL mRNA表达在NSCLC诊断中的意义
方法对2007年8月至2008年5月南通大学附属医院71例NSCLC患者和62例肺部良性病变患者痰中APRIL mRNA进行检测,同时取65名健康成人痰做对照.用RFQ-PCR技术实时检测PCR产物的荧光强度,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量,以靶基因和内参β2-微球蛋白(β2-M)mRNA含量的比值作为评价其表达水平的指标,并与细胞学检查结果进行比较.计量资料采用t检验,所得结果用x±s表示;对计数资料采用X2检验
结果RFQ-PCR法检测APRIL mRNA含最的线性范围为38～3.8×106copies/ul,批内和批间变异系数(CV)分别为8.5%和13.6%.NSCLC组痰中APRIL mRNA表达水平显著高于肺部良性病变组和健康对照组(t值为10.50和11.32,P<0.01);良性病变组与健康组比较差异无统计学意义(t=0.379,P>0.05).以健康组APRIL mRNA的x±2s为cut-off值,肺癌组APRIL mRNA表达的阳性率为81.7%(58/71),明显高于肺部良性病变组的3.2%(2/62)和健康对照组的1.5%(1/65).NSCLC组痰中APRIL mRNA的表达与性别、年龄、吸烟史、TNM分期及淋巴结转移尤关(t值分别为1.700、1.014、1.484、1.298及1.186,均P>0.05),与病理分型和肿瘤部位有关(t值为1.650和1.873,均P<0.05).RFQ-PCR阳性率为82%(58/71),高于细胞形态学阳性率的14%(10/71),差异有统计学意义(X2=67.68,P<0.01)
结论RFQ-PCR检测痰中APRIL mRNA含量具有较高的敏感度和特异度,有助于NSCLC的临床诊断.