【摘 要】
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目的 筛选并确立流感病毒H1N1 A/Nebraska/14/2019血凝素（HA）的最佳蛋白疫苗策略。方法 分别构建HA全长、HA胞外区C端不同的突变体及共表达HA/M1的重组杆状病毒，感染昆虫细胞表达80 h后，收取培养上清，Western blot鉴定重组抗原的表达，同时采用血凝试验间接分析其免疫原性。然后大量表达HA/M1蛋白，Core700纯化后分析蛋白颗粒的理化性质、血凝活性及稳定性。
【机 构】
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中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理及结构生物学系
【基金项目】
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中国医学科学院医学与健康科技创新工程（2021-I2M-1-043）； 国家自然科学基金（31970867）；
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目的 筛选并确立流感病毒H1N1 A/Nebraska/14/2019血凝素（HA）的最佳蛋白疫苗策略。方法 分别构建HA全长、HA胞外区C端不同的突变体及共表达HA/M1的重组杆状病毒，感染昆虫细胞表达80 h后，收取培养上清，Western blot鉴定重组抗原的表达，同时采用血凝试验间接分析其免疫原性。然后大量表达HA/M1蛋白，Core700纯化后分析蛋白颗粒的理化性质、血凝活性及稳定性。结果 2种HA胞外区的C端突变体虽均以三聚体形式表达，但表达上清无血凝活性；HA全长三聚体具有较好的血凝活性，但为膜蛋白，纯化难度大。HA/M1共表达上清具有血凝活性，HA/M1表达上清经Core700纯化，透射电子显微镜分析显示为80 nm～150 nm病毒样颗粒（VLP）。HA-M1-VLP的血凝效价高达26,动态光散射显示HA-M1-VLP在4℃保存3个月性质稳定。结论 HA-M1-VLP易于表达纯化、稳定性好，且血凝活性高，可用于流感病毒H1N1蛋白疫苗的研究。
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