【摘 要】
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目的:探讨micro RNA-29c(miR-29c)过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响及机制。方法:体外传代培养P19细胞,利用细胞转染技术构建miR-29c过表达细胞(mimic组)。CCK-8试剂盒
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院心胸外科;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81573234);江苏省妇幼健康科研项目(F201509)
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目的:探讨micro RNA-29c(miR-29c)过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响及机制。方法:体外传代培养P19细胞,利用细胞转染技术构建miR-29c过表达细胞(mimic组)。CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期;Hoechst染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡情况,定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测凋亡相关因子Bax/Bcl-2表达情况;二甲亚砜(DMSO)诱导P19细胞分化,定量PCR检测心肌特异性标志基因肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,αMHC),转录因子GATA4和心肌增强因子2c(myocyte enhancer factor 2c,Mef2c)表达情况,明确miR-29c过表达对P19细胞分化的影响;生物信息学分析结合荧光素酶报告实验和Western blot明确miR-29c的靶基因。结果:与对照组相比,miR-29c过表达组细胞增殖速率较慢,细胞周期S期比例降低;miR-29c过表达组细胞凋亡率增高,Bax表达水平增高,而Bcl-2表达无明显差异;P19细胞分化第6天和第8天miR-29c过表达组αMHC、GATA4和Mef2c的表达水平显著高于对照组;Akt3被证实为miR-29c的靶基因。结论:miR-29c过表达可能是通过调控Akt3来抑制P19细胞增殖、促进P19细胞的凋亡和分化。
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