【摘 要】
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目的 探讨肺动脉平滑肌细胞与内皮细胞的胞间通讯在促进动脉型肺动脉高压（PAH）疾病进展中的作用机制。方法 采集并分离健康个体（HC）和PAH患者外周血浆中的外泌体，并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析。体外缺氧诱导处理原代人肺动脉平滑肌细胞（h PASMCs）和原代肺动脉内皮细胞（hPAECs），分为常氧组和缺氧诱导组。生物信息学分析miR-106b-5p和USP32的序列互作位点。
【基金项目】
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省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题项目（编号：SKL-HIDCA-2020-WF2）；
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目的 探讨肺动脉平滑肌细胞与内皮细胞的胞间通讯在促进动脉型肺动脉高压（PAH）疾病进展中的作用机制。方法 采集并分离健康个体（HC）和PAH患者外周血浆中的外泌体，并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析。体外缺氧诱导处理原代人肺动脉平滑肌细胞（h PASMCs）和原代肺动脉内皮细胞（hPAECs），分为常氧组和缺氧诱导组。生物信息学分析miR-106b-5p和USP32的序列互作位点。腺病毒转染过表达/敲低h PASMCs内miR-106b-5p，过表达/敲低hPAECs内PKM2。双荧光素酶报告基因分析确证二者的负作用方式。Western blot法测定胞内USP32、PKM2、GLUT1、HK2、LDHA蛋白质的表达水平。结果 微阵列测定和差异表达分析结果显示，与HC组相比，PAH组外周血浆中外泌体内miR-106b-5p的水平明显上调。在体外，与常氧组相比，miR-106b-5p的水平在缺氧诱导组hPASMCs上清液外泌体内明显上调，而在h PAECs细胞上清液外泌体中则无此变化。miR-106b-5p负调控USP32的表达。与miR-NC组/Inhibitor-NC组相比，在h PASMCs中miR-106b-5pmimic/miR-106b-5pinhibitor处理后，胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显增强/抑制。与shRNA-NT组/vector组相比，在hPAECs中PKM2 shRNA/PKM2-OE处理后，胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显抑制/增强（P ＜0.05）。结论 hPASMCs通过外泌体上调miR-106b-5p增强hPAECs胞内Warburg效应，在动脉型肺动脉高压中具有潜在的促进疾病进展的作用。
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