血小板生成素突变体的克隆和扩增及其融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的研究

来源 :中华血液学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rj1340
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目的:

通过获得编码血小板生成素(Tpo)成熟肽N端1~196个氨基酸的突变体cDNA在大肠杆菌JM109中的表达,为Tpo进一步的结构和功能研究提供材料来源,

方法:

用多聚酶链反应(PCR)及DNA重组技术,将PCR产物克隆到pUC19载体并测序,然后克隆到表达载体pMAL-c2上。

结果:

转化重组质粒pMAL-MBP/TpoM的大肠杆菌经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导4~5小时,SDS-PAGE分析显示融合蛋白(MBP/TpoM)的分子量约为6.3万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的37%。

结论:

经PCR方法扩增的Tpo基因突变体可在大肠杆菌中高效表达,为Tpo突变体的进一步结构和功能研究以及Tpo抗体的制备打下了基础。

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