论文部分内容阅读
目的:
通过获得编码血小板生成素(Tpo)成熟肽N端1~196个氨基酸的突变体cDNA在大肠杆菌JM109中的表达,为Tpo进一步的结构和功能研究提供材料来源,
方法:用多聚酶链反应(PCR)及DNA重组技术,将PCR产物克隆到pUC19载体并测序,然后克隆到表达载体pMAL-c2上。
结果:转化重组质粒pMAL-MBP/TpoM的大肠杆菌经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导4~5小时,SDS-PAGE分析显示融合蛋白(MBP/TpoM)的分子量约为6.3万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的37%。
结论:经PCR方法扩增的Tpo基因突变体可在大肠杆菌中高效表达,为Tpo突变体的进一步结构和功能研究以及Tpo抗体的制备打下了基础。